LC-MS辅助NMR信号归属的蛋白质高级结构表征方法研究

目录

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符号说明

1 前言

1.1 蛋白质的结构表征

1.2 氨基酸特殊标记与质谱技术联用研究蛋白质结构与功能

1.3 立题依据

1.4 本论文中研究的蛋白质

1.5 本论文的研究内容及创新点

2 泛素蛋白的表达纯化及鉴定

2.1 实验仪器、实验材料

2.2 泛素蛋白的诱导表达和纯化

2.3 泛素 1H-15N HSQC谱图

2.4 泛素蛋白的氨基酸序列

2.5 泛素蛋白DSC考察

2.6 讨论

2.7 本章小结

3 LC-MS定量分析蛋白质中精氨酸修饰速率的方法建立

3.1 实验仪器与实验材料

3.2 溶液配制

3.3 精氨酸的专属性化学修饰

3.4 酶切样品制备

3.5 Skyline软件预测酶切肽段及离子对的选择

3.6 实验结果

3.7 讨论

3.8 本章小结

4 NMR定量检测蛋白质中精氨酸修饰速率的方法建立

4.1 实验仪器、实验材料

4.2 溶液配制

4.3 1H-15N HSQC谱图采集和目标/内标信号的确定

4.4 利用H2BC谱归属 1H-15N HSQC谱图中精氨酸信号

4.5 讨论

4.6 本章小结

5 MS辅助归属自然丰度泛素中精氨酸侧链NMR信号

5.1 实验仪器、实验材料

5.2 溶液配制

5.3 精氨酸的专属性化学修饰

5.4 专属性修饰后LC-MS信号衰减的测量

5.5 专属性修饰后NMR信号的衰减

5.6 实验结果

5.7 讨论

6 一种新的靶向CGRP抗体的制备研究

6.1 实验仪器、实验材料

6.2 一种新的靶向CGRP抗体以及对照抗体的制备

6.3 CGRP抗体的蛋白序列

6.4 CGRP抗体纯度检测

6.5 CGRP抗体结合活性方法的建立和检测

6.6 讨论

6.7 本章小结

7 靶向CGRP抗体的抗原表位研究

7.1 实验仪器、实验材料

7.2 ELISA法研究CGRP抗体的抗原表位

7.3 NMR法研究CGRP抗体的抗原表位

7.4 LC-MS辅助归属抗原中精氨酸MNR信号

7.5 讨论

7.6 本章小结

8 总结与展望

8.1 总结

8.2 未来研究展望

参考文献

攻读学位期间的科研成果

致谢

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