HCAEC中沉默信息调节因子1参与相关炎症因子调控的研究

摘要

目的：探讨人冠状动脉内皮细胞（HCAEC）中沉默信息调节因子1（SIRT1）发挥的抗炎作用；探究SIRT1在HCAEC中发挥抗炎作用的可能机制。　　方法：将人冠状动脉内皮细胞分为正常对照组、sirt1过表达组、sirt1干扰组、sirt1干扰组+NF-κB阻滞组。利用Lipofectamine2000脂质体转染法转染人冠状动脉内皮HCAEC细胞株，荧光显微镜下观察24h、48h及72h转染效率。应用qRT-PCR法检测转染前后HCAEC细胞中sirt1及其下游因子NF-κB、ICAM1的mRNA水平；Western Blot检测转染前后HCAEC细胞中SIRT1及其下游因子NF-κB、ICAM1蛋白表达水平；ELISA法检测各组IL-1、hs-CRP的表达；细胞免疫荧光实验观察PDTC作用后NF-κB入核情况；应用PDTC作用于sirt1干扰组并观察其下游ICAM1、IL-1及hs-CRP变化。　　结果：（1）脂质体Lipofectamine2000转染HCAEC细胞，转染sirt1组荧光显微镜下观察48h转染效率最好，mRNA及蛋白水平验证sirt1能够成功表达；（2）24h及48h测定NF-κB、ICAM1mRNA水平sirt1过表达组明显低于正常对照组（P＜0.05），sirt1干扰组明显高于正常对照组（P＜0.05）；（3）48h及72h测定NF-κB、ICAM1、IL-1及hs-CRP蛋白水平sirt1过表达组均低于正常对照组(P＜0.05)，sirt1干扰组明显高于正常对照组（P＜0.05）；（4）与正常对照组比较，PDTC作用后NF-κB入核减少；（5）mRNA水平测定24h及48h sirt1干扰组+NF-κB阻滞组较sirt1干扰组及正常对照组ICAM1表达降低（P＜0.05)；（6）蛋白水平测定48h及72h sirt1干扰组+NF-κB阻滞组较sirt1干扰组及正常对照组ICAM1、IL-1、hs-CRP表达降低（P＜0.05）。　　结论：（1）转染了GV230-SIRT1、GV248-SIRT1重组质粒的人冠状动脉HCAEC细胞能够实现SIRT1成功表达。（2）sirt1过表达组NF-κB、ICAM1在mRNA水平表达较正常对照组降低，sirt1干扰组NF-κB、ICAM1表达高于正常对照组，说明sirt1在mRNA水平发挥抗炎作用。（3）sirt1过表达组NF-κB、ICAM1、IL-1及hs-CRP在蛋白水平表达较正常对照组降低，sirt1干扰组则表达高于正常对照组，说明sirt1在蛋白水平发挥抗炎作用。（4）PDTC能够抑制NF-κB入核，抑制NF-κB功能的发挥。（5）sirt1干扰组行PDTC干预后较sirt1干扰组及正常对照组mRNA水平ICAM1表达降低，且48h较24h降低更加显著。（6）sirt1干扰组行PDTC干预后较sirt1干扰组及正常对照组蛋白水平ICAM1、IL-1及hs-CRP表达降低，且72h较48h降低更加显著。说明sirt1发挥的抗炎作用是通过NF-κB实现的。

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