麝香乌龙丸对AA大鼠垂体组织形态及ACTH、β-EP表达的影响

摘要

目的：通过观察麝香乌龙丸对大鼠佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis, AA）模型垂体组织形态及促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone, ACTH）、β-内啡肽（β-endorphin,β-EP）表达的影响，探讨麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis, RA）的镇痛作用机制，为其临床应用提供实验与理论依据。　　方法：将60只雄性Wistar大鼠适应性喂养7d后，随机抽取12只，作为正常组。除正常组外，其余48只大鼠均使用乙醚麻醉，于右后足跖注射完全弗氏佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA），建立AA大鼠模型，造模第15天按关节炎指数（arthritis index, AI）随机分成模型组、麝香乌龙丸低剂量组、麝香乌龙丸中剂量组、麝香乌龙丸高剂量组，每组12只。分别给予麝香乌龙丸低、中、高剂量组麝香乌龙丸0.3 g·kg-1，0.6 g·kg-1，1.2 g·kg-1（生理盐水混悬，分别相当于成人用药剂量的3，6，12倍），正常组与模型组给予灌胃等容量生理盐水，每日1次，连续给药2周。第15天将所有大鼠处死后打开脑腔，取出垂体，垂体组织形态观察采用苏木素—伊红（HE）染色方法，在光镜下观察各组垂体组织形态的变化，ACTH、β-EP的表达变化采用免疫组化法进行观察，统计阳性细胞表达率。　　结果：1、对大鼠一般情况的影响：正常组大鼠饮食正常，皮毛光亮，精神状态佳。其余大鼠注射 FCA后出现注射足肿胀并出现左后足及前足红肿，活动减少，饮食饮水减少，毛发稀疏、无光泽，行走困难。给药期间，麝香乌龙丸治疗组大鼠较模型组一般情况较好，反应灵敏，活动增多，足踝和足掌肿胀逐渐减轻，皮毛有光泽。2、对大鼠 AI的影响：与正常组相比造模各组大鼠 AI显著升高（P＜0.05）。治疗后与模型组比较，麝香乌龙丸低、中、高各组AI均明显下降（P＜0.05），尤以麝香乌龙丸高剂量组下降明显。3、对大鼠垂体组织形态的影响：光镜下观察各组HE染色后切片发现，与正常组相比，其余各组垂体组织形态均无明显改变。4对垂体 ACTH表达的影响：采用免疫组化实验方法观察各组大鼠垂体组织内 ACTH表达变化，结果各组 ACTH细胞阳性率分别为正常组40.23±3.43，模型组56.82±3.97，麝香乌龙丸低剂量组53.14±4.16，麝香乌龙丸中剂量组50.14±3.39，麝香乌龙丸高剂量组46.87±3.31。与正常组相比，其余4组 ACTH细胞阳性表达均明显升高，且差异具有统计学意义（P＜0.01）。麝香乌龙丸低剂量组与模型组ACTH阳性表达无显著性差异（P＞0.05）。麝香乌龙丸中剂量组与麝香乌龙丸高剂量组ACTH细胞阳性表达明显低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），麝香乌龙丸低、中、高三组对垂体ACTH阳性细胞表达的影响有剂量相关性，其中以麝香乌龙丸高剂量组下调 ACTH表达最为明显。5、对垂体β-EP表达的影响：采用免疫组化实验方法观察各组大鼠垂体组织内β-EP表达变化，发现各组β-EP细胞阳性率分别为正常组30.84±2.19，模型组39.72±2.66，麝香乌龙丸低剂量组43.55±3.59，麝香乌龙丸中剂量组46.69±3.62，麝香乌龙丸高剂量组49.47±3.17。相较于正常组，模型组与麝香乌龙丸低、中、高各组β-EP细胞阳性表达均明显升高，且差异具有统计学意义（P＜0.01）。麝香乌龙丸低、中、高剂量组β-EP阳性表达均明显高于模型组，且差异具有统计学意义（P＜0.01），麝香乌龙丸低、中、高三组对垂体β-EP阳性细胞表达的影响有剂量相关性，其中以麝香乌龙丸高剂量组升高β-EP表达最为明显。　　结论：麝香乌龙丸可缓解AA大鼠疼痛，其作用机制与调节AA大鼠垂体ACTH、β-EP的表达有关。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 实验材料

1.1.2 实验方法

1.1.3 统计学处理

1.2 结果

1.2.1 一般情况

1.2.2 关节炎指数（AI）

1.2.3 垂体组织形态观察

1.2.4 免疫组化法观察垂体ACTH、β-EP表达

1.3 讨论

1.3.1 中医对RA的认识

1.3.2 西医对RA的认识

1.3.3 RA动物模型的复制与评价

1.3.4 麝香乌龙丸及其组成药物的相关研究

1.3.5 实验观测指标的选择

1.3.6 麝香乌龙丸对AA大鼠垂体β-EP、ACTH的影响

1.3.7 本实验的不足之处及下一步设想

1.4 结论

参考文献

第2章 综 述中医治疗类风湿性关节炎作用机制的研究近况

2.1 对细胞因子的作用

2.1.1 对白细胞介素-1（IL-1）与肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响

2.1.2 对白细胞介素-2（IL-2）的影响

2.1.3 对白细胞介素-6（IL-6）的影响

2.1.4 对血管内皮生长因子（VEGF）的影响

2.1.5 对血其他细胞因子的影响

2.2 对血液流变学的作用

2.3 对免疫系统的调节作用

2.4 抗氧化作用

2.4.1 抗自由基损伤

2.4.2 对NO的影响

2.5 镇痛作用

2.6 对皮质醇的作用

2.7 总结

参考文献

致谢

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