丙型肝炎病毒对动脉粥样硬化相关细胞的作用及其机制研究

摘要

目的：动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)导致的心脑血管疾病凭借高发病率、高致残率、高致死率,严重危害人类生命健康.丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是导致全世界慢性肝病的主要原因之一,80%的感染者会发展为慢性感染,慢性HCV感染不仅是一种全身性疾病,其临床影响和预后不仅取决于与肝病相关的并发症,还取决于与HCV相关的肝外表现.大量研究表明HCV感染是AS的独立危险因素,且在AS患者颈动脉斑块可检出HCV RNA.巨噬细胞、内皮细胞、平滑肌细胞作为AS病灶的三个主要细胞,前期研究表明HCV体外刺激巨噬细胞会引起炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α等表达增高,而HCV对内皮细胞、平滑肌细胞炎症因子的影响尚未见报道.因此本研究主要从炎症角度,集中研究HCV刺激对这三个重要细胞系炎症因子表达及功能变化的影响,以探讨HCV影响AS发生发展的病理机制.　　方法：1、采用PMA诱导THP-1细胞成巨噬细胞,中性红吞噬实验检测巨噬细胞的吞噬能力,流式细胞仪检测巨噬细胞特异性抗原的表达,采用1.0MOI感染性HCV病毒颗粒(cell-culture-derived infectious HCV,HCVcc)刺激巨噬细胞,CCK8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期;Transwell实验评估HCV感染巨噬细胞对其趋化单核细胞能力的影响;荧光定量PCR及Western Blot检测HCV刺激巨噬细胞后炎症因子的表达.2、采用1.0MOI HCVcc刺激人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),CCK8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期;划痕实验及单核内皮粘附实验评估HCV对HUVECs迁移及粘附能力的影响;荧光定量PCR及Western Blot检测HCV刺激HUVECs炎症因子及内皮损伤因子的表达.3、采用1.0MOI HCVcc刺激人主动脉平滑肌细胞(Human aortic smooth muscle cells,HASMCs),CCK8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期;荧光定量PCR及Western Blot检测HCV刺激HASMCs对其炎症因子及表型转换的影响.　　结果：1、诱导后的巨噬细胞吞噬能力明显增强,同时巨噬细胞特异性抗原CD11b、CD68表达增加.HCV刺激明显抑制巨噬细胞的生长增殖,促进巨噬细胞凋亡,并促进单核细胞的趋化聚集.HCV刺激引起巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1β、MCP-1mRNA水平及蛋白水平的表达明显增高(P<0.05),而TNF-α仅有mRNA水平表达增高(P<0.05),蛋白水平无明显变化(P>0.05).2、HCV对HUVECs的生长增殖、细胞凋亡及周期无明显影响,HCV刺激抑制了HUVECs的迁移能力,而增强其粘附能力.HCV刺激促进了内皮细胞炎症因子IL-6、IL-1β、MCP-1mRNA水平及蛋白水平的表达(P<0.05),而TNF-αmRNA水平和蛋白水平均无明显变化(P>0.05).HCV刺激导致HUVECs内皮损伤因子ET-1、VEGF以及粘附分子ICAM1、VCAM1表达上调(P<0.05).3、HCV刺激可以促进平滑肌细胞的增殖(P<0.05),而对平滑肌细胞的凋亡和周期,以及炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1mRNA水平和蛋白水平的表达无明显影响.HCV刺激平滑肌细胞导致其收缩表型标志物a-SMA蛋白水平表达明显降低,合成表型标志物OPN蛋白水平略有升高(P<0.05).　　结论：HCV可以引起巨噬细胞增殖受抑、凋亡增加和炎症因子表达增加,并引起内皮细胞炎症改变和功能障碍,以及引起平滑肌细胞增殖增加和细胞由收缩表型向合成表型转换,进而参与影响动脉粥样硬化的发生.

目录

前言

第一章 丙型肝炎病毒对巨噬细胞的作用及其机制研究

材料与方法

1 实验材料与仪器

2实验方法

3 统计学分析

结果

1 HCVcc病毒滴度以及感染力的测定

2巨噬细胞的诱导

3 HCVcc刺激对巨噬细胞增殖的影响

4 HCVcc刺激对巨噬细胞细胞凋亡和周期的影响

5 HCV感染巨噬细胞对单核细胞迁移能力的影响

6 HCVcc对巨噬细胞炎症因子mRNA水平表达的影响

7 HCVcc对巨噬细胞炎症因子蛋白水平表达的影响

讨论

第二章 丙型肝炎病毒对内皮细胞的作用及其机制研究

材料与方法

1实验材料与仪器

2 实验方法

3统计学分析

结果

1 HCV刺激对HUVECs增殖的影响

2 HCV刺激对HUVECs细胞凋亡和周期的影响

3 HCV刺激对HUVECs迁移能力和粘附能力的影响

4 HCV刺激对HUVECs炎症因子mRNA水平表达的影响

5 HCV刺激对HUVECs炎症因子蛋白水平表达的影响

讨论

第三章 丙型肝炎病毒对平滑肌细胞的作用及其机制研究

材料与方法

1实验材料

2实验方法

3 统计学分析

结果

1 HCVcc刺激对HASMCs增殖的影响

2 HCVcc刺激对HASMCs细胞凋亡和周期的影响

3 HCVcc刺激对HASMCs炎症因子mRNA水平表达的影响

4 HCVcc刺激对HASMCs炎症因子蛋白水平表达的影响

5 HCVcc 刺激对HASMCs表型转换的影响

讨论

结论

参考文献

汉英缩略词表

致谢

综述:丙型肝炎病毒感染与动脉粥样硬化关系的研究进展

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