粒毛盘菌YM405胞外多糖的结构表征、分子修饰及其生物活性研究

摘要

本文研究了粒毛盘菌YM405胞外多糖的分离纯化、结构表征、对皮肤创面组织修复作用,及其磷酸酯化修饰、硫酸酯化修饰以及修饰前后的抗氧化、抗肿瘤活性。
　　粒毛盘菌YM405发酵液经醇沉、脱色及脱蛋白后获得胞外多糖(LEP),再经DEAE-cellulose52、Sepharose CL-6B柱色谱分离纯化,得单一组分LEP-2b;高效凝胶渗透色谱检测其为均一多糖,分子量为2.8×104 Da。GC-MS、高碘酸氧化-Smith降解、甲基化分析、部分酸水解、FT-IR、NMR等实验结果表明LEP-2b由鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)构成,其摩尔比为1.0:5.0:11.5:12.5;→4)-β-D-Manp-(1→、→2)-α-D-Rhap-(1→、→6)-β-D-Glcp-(1→和→6)-α-D-Galp-(1→构成 LEP-2b的主链;→6)-α-D-1-OMe-Manf-(2→、→6)-β-D-1-OMe-Manf-(2→、→1)-α-D-Galp-(6→、→1)-β-D-Galp-(6→和→1)-β-D-Glcp构成三种支链,分别连接在主链上Manp的C-3位和同一个Glcp的C-2与C-3位。用不同含量的LEP-2b软膏处理浅II度烫伤模型小鼠皮肤创面。与阴性对照组相比,3％LEP-2b能显著加快烫伤皮肤创面脱痂,缩短愈合时间,显著提高小鼠愈合皮肤的含水量与羟脯氨酸含量。与空白对照组相比,高剂量组小鼠创面皮肤在愈合初期的炎症细胞浸润明显较少,且在后期新皮组织完好,可见许多新生微血管。以上结果表明,LEP-2b是一种复杂的杂多糖;它可抑制烫伤皮肤的炎症反应、加快组织修复与再上皮化,对其愈合具有良好的促进作用。
　　对LEP-2b进行化学修饰,获得取代度为0.174的磷酸酯化多糖 PLEP-2b和取代度为0.431的硫酸酯化多糖 SLEP-2b。经紫外光谱、红外光谱验证,多糖的磷酸酯化和硫酸酯化修饰成功。核磁共振碳谱分析结果表明,磷酸基-PO3H2取代在1,4-β-D-Manp的C-6、2,6-β-D-1-OMe-Manf的C-5、1,6-β-D-Galp的C-3、1-β-D-Glcp的C-2、1,2-α-D-Rhap的C-6上,而硫酸基-SO3H主要取代在1,4-β-D-Manp的C-6、1-β-D-Glcp的C-6、1,2-α-D-Rhap的C-6位。体外抗氧化实验发现,多糖经磷酸酯化和硫酸酯化修饰后,尽管还原力增加不明显,但对羟基自由基、超氧阴离子的清除作用都显著增强。体外抗肿瘤活性实验结果显示,磷酸酯化和硫酸酯化修饰显著增强了多糖对小鼠 CT26结肠癌细胞、小鼠 Lewis肺癌细胞和人肝癌 HepG2细胞增殖的抑制作用。

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第一章 绪论

1.1 真菌多糖的提取

1.2 真菌多糖的分离纯化

1.3 多糖的纯度与分子量的测定

1.4 多糖的结构解析

1.5 真菌多糖的生物活性

1.6 多糖的构效关系

1.7 多糖的结构修饰

1.8 粒毛盘菌多糖的研究概况

1.9 本课题研究的内容与意义

第二章 粒毛盘菌YM405胞外多糖的纯化、结构表征及其促进创面愈合活性

2.1 引言

2.2 材料和方法

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

第三章 粒毛盘菌YM405胞外多糖衍生物的结构特点及生物活性

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.3 结果与讨论

3.4 本章小结

第四章 结论与展望

4.1 结论

4.2 创新点

4.3 展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及申报的专利