在宫颈癌细胞中HPV18E6/E7调节METTL3介导m6A RNA修饰机制研究

目录

声明

缩略语

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、宫颈癌细胞中HPV18E6/E7上调METTL3的表达

1.1 材料和方法

1.1.1 实验材料

1.1.2 实验方法

1.1.3 统计学方法

1.2.1双荧光酶报告系统检测METTL3启动子活性

1.2.2 HPV18E6/E7过表达及敲降质粒有效性的验证

1.2.3 HPV18E6/E7诱导METTL3的表达

1.3 小结

二、HPV18E6/E7通过调控NR3C1诱导METTL3的表达

2.1.2 实验方法

2.1.3 统计学方法

2.2.2 细胞转录因子对METTL3的调节作用

2.2.3 NR3C1上调METTL3启动子的活性表达

2.2.4 NR3C1上调METTL3的mRNA和蛋白表达水平

2.2.5 HPV18E6/E7上调NR3C1的mRNA和蛋白水平的表达

2.3小结

三、METTL3上调HPV18E6/E7的表达

3.1.2 实验方法

3.1.3 统计学方法

3.2.1 HPV18E6/E7的mRNA存在m6A潜在的修饰位点

3.2.2 Me-RIP检测HeLa细胞中HPV18E6/E7的m6A甲基化水平

3.2.3 METTL3上调HPV18E6/E7 的m6A甲基化水平

3.2.4 METTL3上调HPV18E6/E7 mRNA的表达水平

3.2.5 METTL3延长HPV18E6/E7 mRNA的半衰期

3.2.6 METTL3上调HPV18E6/E7的蛋白水平的表达

3.3 小结

四、YTHDF1以m6A依赖的方式促进HPV18E6/E7的翻译

4.1.2 实验方法

4.1.3 统计学方法

4.2.1 YTHDF1蛋白与HPV18E6/E7的mRNA之间存在直接相互作用

4.2.2 YTHDF1对HPV18E6/E7翻译水平的调节依赖于METTL3介导的m6A修饰

4.3 小结

五、METTL3抑制下游靶基因PER1的表达

5.1.2 实验方法

5.1.3 统计学方法

5.2.1 RIP-Seq筛选与METTL3相互作用的候选基因的RNA

5.2.2 Western Blotting检测METTL3对候选基因蛋白表达的影响

5.2.3 METTL3上调PER1的m6A甲基化水平

5.2.4 METTL3下调PER1 的mRNA水平

5.2.5 HPV18E6/E7抑制PER1的表达

5.3 小结

讨论

结论

参考文献

综述:m6A修饰与癌症

综述参考文献

个人简历