高糖状态下视网膜血管内皮细胞基因表达谱的RNA-Seq分析

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、高糖诱导RF/6A糖尿病视网膜病变模型建立

1.1对象和方法

1.1.1实验试剂

1.1.2实验器械

1.1.3实验对象及分组

1.1.4 MTT细胞增殖实验

1.1.5 细胞划痕实验

1.1.6 Transwell实验

1.1.7 管腔形成实验

1.2结果

1.2.1 RF/6A细胞的培养和生长形态

1.2.3细胞划痕实验测定高糖模型下RF/6A的迁移率

1.2.4管腔形成实验测定高糖模型下RF/6A的管腔形成率

1.3讨论

1.4小结

二、高糖刺激对RF/6A细胞转录组学的影响

2.1对象和方法

2.1.1实验试剂

2.1.2实验器械

2.1.4总RNA提取以及样品检测

2.1.5 转录组文库构建

2.1.6文库质检及上机测序

2.1.7 GO功能分析

2.1.8 Pathway显著性富集分析

2.2结果

2.2.1 测序样品质量评估

2.2.2 差异基因总体分析

2.2.3 差异基因功能性富集分析

2.2.4 差异基因pathway功能富集分析

2.2.5 差异基因筛选及分析

2.3讨论

2.4小结

三、差异基因在多模型中的验证

3.1对象和方法

3.1.1实验试剂

3.1.2实验器械

3.1.3 高糖细胞模型构建

3.1.4 外周血样本收集以及外周血单核细胞提取

3.1.5 STZ糖尿病大鼠模型诱导

3.1.6 4-HNE对视网膜细胞的诱导

3.1.7 MTT细胞增殖实验

3.1.8 细胞划痕实验

3.1.9 Transwell实验

3.1.10 管腔形成实验

3.1.11 免疫荧光实验

3.1.12 细胞蛋白质免疫印迹

3.1.13总RNA提取

3.1.14逆转录合成cDNA

3.1.15 PCR检测相关基因表达

3.2结果

3.2.1 在RF/6A高糖细胞中验证差异基因表达

3.2.2 测定糖尿病患者外周血单核细胞中验证差异基因表达

3.2.3 糖尿病大鼠模型中验证差异基因表达

3.2.4 建立HRCEC糖尿病视网膜病变细胞模型

3.2.5 HRCEC糖尿病视网膜病变细胞模型中验证差异基因的表达

3.2.6 建立Müller糖尿病视网膜病变细胞模型

3.2.7 Müller糖尿病视网膜病变细胞模型中验证差异基因的表达

3.2.8 建立RPE糖尿病视网膜病变细胞模型

3.2.9 RPE糖尿病视网膜病变细胞模型中验证差异基因的表达

3.3讨论

3.4小结

四、差异基因的功能验证

4.1对象和方法

4.1.1实验试剂

4.1.2实验器械

4.1.3 MTT细胞增殖实验

4.1.4 细胞划痕实验

4.1.5 免疫荧光实验

4.1.6细胞蛋白质免疫印迹实验

4.1.7 RT-qPCR

4.2结果

4.2.1 BMP4能促进视网膜细胞的增殖迁移

4.2.2 BMP4能促进下游因子SMAD9的表达

4.2.3 BMP4能促进VEGF以及纤维化因子的表达

4.3讨论

4.4小结

结论

参考文献

综述:糖尿病视网膜病变与代谢记忆

综述参考文献

致谢

个人简历