声明
缩略语对照表
第一章 绪论
1.1 生物体内萜类化合物的合成途径
1.1.1 萜类化合物简介
1.1.2 萜类化合物的命名及分类
1.1.3 萜类化合物的生物学功能
1.2 生物体内萜类化合物的合成途径
1.2.1 生物体内萜类化合物合成途径的研究
1.2.2 MVA途径
1.2.3 MEP 途径
1.3 DXS关键氨基酸残基的研究
1.3.1 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸（DXP）简介
1.3.2 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶（DXS）简介
1.3.3 DXS 催化机制的研究
1.3.4 DXS 关键氨基酸残基的研究
1.4 本课题所使用实验方法的理论依据
1.4.1 体外定点突变
1.4.2 高效液相色谱法（HPLC）
1.5 本章小结
1.5.1 DXS 关键氨基酸残基的研究
第二章野生型 EcDXS 的表达、纯化及活性测定
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 实验菌种
2.1.2 实验试剂
2.1.3 仪器设备
2.1.4 实验配方
2.2 实验方法
2.2.1 野生型EcDXS 菌种的活化、扩大培养及诱导表达
2.2.2 亲和层析法纯化野生型EcDXS
2.2.3 野生型EcDXS 蛋白浓度测定
2.2.4 SDS-PAGE分析目标蛋白的分子量
2.2.5 酶偶联法检测野生型EcDXS 蛋白活性
2.3 实验结果
2.3.1 野生型EcDXS 菌种的活化、扩大培养及诱导表达的实验结果
2.3.2 野生型EcDXS 蛋白浓度测定结果
2.3.3 酶偶联法检测野生型EcDXS 蛋白活性实验结果
2.4 本章小结
第三章 EcDXS 突变体的制备、表达、纯化与活性测定
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 实验菌种
3.1.2 实验试剂
3.1.3 仪器设备
3.1.4 实验试剂
3.2 实验方法
3.2.1 反向PCR 原理
3.2.2 野生型EcDXS 质粒的提取
3.2.3 突变体EcDXS-R420D的制备
3.2.4 剩余突变体的制备
3.2.8 SDS-PAGE分析目标蛋白的分子量
3.2.9 酶偶联法检测突变体EcDXS 蛋白活性
3.3 实验结果
3.3.1 突变体EcDXS 测序结果
3.3.2 突变体EcDXS 菌种的活化、扩大培养及诱导表达的实验结果
3.3.3 突变体Ec DXS 蛋白浓度测定结果
3.3.4 酶偶联法检测突变体EcDXS 蛋白活性实验结果
3.4 本章小结
第四章 EcDXS 突变体底物谱的研究
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 实验试剂
4.1.2 仪器设备
4.1.3 实验配方
4.2 实验方法
4.2.1 确定NPDA与丙酮酸衍生物的最大吸收波长
4.2.2 突变体EcDXS 底物谱的研究
4.3 实验结果
4.3.1 NPDA与丙酮酸衍生物的最大吸收波长测定结果
4.3.2 大肠杆菌DXS 底物谱研究的实验结果
4.3.3 比较酶偶联法与柱前衍生-HPLC 所测EcDXS 催化活性
4.4 本章小结
第五章 EcDXS 催化不同底物反应生成的产物研究
5.1 实验材料与仪器
5.1.1 实验试剂
5.1.2 仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 EcDXS 催化丙酮酸与苯甲醛反应的研究
5.2.2 EcDXS 催化丙酮酸自身反应的研究
5.2.3 TPP、Mg2+对DXS 催化丙酮酸自身反应影响的研究
5.2.4 EcDXS 催化丙酮酸与2-丁酮酸缩合反应的研究
5.3 实验结果
5.3.1 EcDXS 催化丙酮酸与苯甲醛反应的研究
5.3.2 EcDXS 催化丙酮酸自身反应的研究
5.3.3 TPP、Mg2+对DXS 催化丙酮酸自身反应影响的研究
5.3.4 EcDXS 催化丙酮酸与2-丁酮酸缩合反应的研究
5.4 本章小结
全文总结
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间取得的科研成果
作者简介
西北大学;
