肝细胞生长因子激活物抑制因子--1基因对前列腺癌PC--3细胞自噬的影响

目录

声明

符号说明

前言

1.前列腺癌研究概述

2.肝细胞生长因子激活物抑制因子-1（Hepatocyte growth factor activator inhibitor-1， HAI-1）概述

3.自噬（Autophagy）

4.自噬的相关基因（Autophagy-related-genes，ATGs）

材料与方法

1.主要材料

1.1.实验细胞

1.2.细胞培养及相关试剂

1.3.质粒转化、转染试剂及药物

1.4.质粒提取

1.5.RNA提取、反转录、实时定量PCR

1.6.凝胶电泳相关试剂

1.7.Western Blot检测试剂

1.8.电镜观察所用试剂

1.9.细胞免疫荧光主要试剂

1.10.主要仪器设备

2.实验方法

2.1.前列腺癌PC-3细胞培养

2.2.重组表达质粒的转化、抽提

2.3.PC-3细胞转染及分组

2.4.RT-PCR检测HAI-1、Beclin 1的mRNA表达量

2.5.琼脂糖凝胶电泳分离DNA

2.6.蛋白印迹分析（Western Blot）检测LC3Ⅱ/Ⅰ比率以及Beclin 1的表达

2.7.透射电镜观察自噬泡形态

2.8.免疫荧光法检测LC3-Ⅱ蛋白的表达

2.10.统计学处理

结果

1.HAI-1在PC-3细胞中的表达效率检测

1.1.RT-PCR检测HAI-1 mRNA、LC3 II和Beclin 1 mRNA表达水平

1.2.DNA电泳检测HAI-1在PC-3细胞中的表达

2.HAI-1对前列腺癌PC-3细胞自噬的影响

2.1.Western印迹分析

2.2.细胞超微结构观察

2.3.免疫荧光检测

讨论

结论

参考文献

综述:HAI-1基因在泌尿系肿瘤中的研究概况

参考文献

致谢

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个人简介

开题、中期及学位论文答辩委员组成