广枣总黄酮对早期激素性股骨头坏死的抗凋亡作用实验研究

摘要

目的：本课题利用马血清联合糖皮质激素建立兔激素性股骨头坏死动物模型，利用99mTc-Cys-AnnexinV凋亡显像观察早期股骨头坏死显像剂摄取情况，并进行同时间点的核磁检查，研究细胞凋亡与激素性股骨头坏死的关系。同时，采用蒙药广枣总黄酮进行干预，研究广枣总黄酮对激素性股骨头坏死细胞凋亡的影响，对激素性股骨头坏死的诊断和治疗探索新的方法和途径。　　方法：　　1、动物分组：选取成年健康5月龄新西兰大白兔34只，体重2.61±0.17kg，雌雄不限，随机分为三组，阳性对照组12只，实验组12只，阴性对照组10只；　　2、动物建模：阳性对照组注射马血清和激素建立股骨头坏死模型后注射生理盐水，实验组在建模成功基础上给予造模成功兔广枣总黄酮注射液21天，阴性对照组同时间段均给予注射生理盐水。　　3、检测方法：分别于造模开始后的第5、6、7、8周行MRI检查和99mTc-Cys-AnnexinV凋亡显像，于实验结束后取双侧股骨头标本做病理组织学观察和免疫组化，检测内容包括 Bcl-2、Bax。　　结果：　　1、99mTc-Cys-AnnexinV显像结果与同时期MRI显像结果：实验组与阳性对照组在相同时间点对比，99mTc-Cys-AnnexinV显像观察到了显像剂聚集高信号，而核磁结果仅在第六周开始出现 T2W1像内关节腔积液和点状高信号，同时期两组显像结果比较，99mTc-Cys-AnnexinV显像灵敏度高于同时期MRI显像。阳性对照组及实验组最终的股骨头坏死发生率为70%和72.7%，阴性对照组无股骨头坏死发生。阳性对照组与实验组股骨头坏死发生率差异无统计学意义（P＞.05）。阴性对照组99mTc-Cys-AnnexinV显像与MRI显像均未见直接或间接股骨头坏死影像证据。　　2、病理组织学结果评价：阳性对照组：软骨层软骨细胞减少，部分软骨细胞变性、坏死，粘液基质增多，软骨细胞排列紊乱。软骨下部分骨小梁断裂，骨小梁内骨细胞核固缩，有的核消失，形成空骨陷窝。骨髓腔内骨质疏松，局灶性片状坏死，骨小梁周边骨细胞消失，骨小梁血管内血栓形成。骨髓可见出血、坏死，脂肪细胞液化、坏死，部分脂肪细胞融合、肥大，形成脂肪球。实验组：软骨下骨板变薄，可见毛细血管，骨小梁排列整齐，偶见骨小梁内骨细胞核固缩，空骨陷窝较少，骨髓腔骨质疏松。骨髓腔内脂肪细胞较少，红细胞丰富，红骨髓较多。阴性对照组：软骨基质丰富，软骨下骨板连续，毛细血管丰富，骨小梁粗大，分支较多，未见空骨陷窝，骨陷窝内骨细胞形态正常，核大且位于中心，骨髓腔内脂肪细胞较少。骨髓腔红骨髓丰富，未见脂肪细胞增多及肥大。　　3、免疫组化结果：阳性对照组：阳性对照组Bcl-2和Bax相关蛋白较阴性对照组均升高，Bax升高较Bcl-2明显（阳性细胞比率），二者比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。实验组：实验组骨细胞Bcl-2和Bax相关蛋白较阴性对照组均升高，Bcl-2升高较Bax明显，二者比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。阴性对照组：阴性对照组骨细胞Bcl-2和Bax表达均低于阳性对照组和实验组。两组结果分别同阴性对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1、马血清联合激素可以建立早期激素性股骨头坏死动物模型。　　2、广枣总黄酮注射液可以影响股骨头坏死的疾病进展。　　3、99mTc-Cys-AnnexinV凋亡显像可在早期诊断股骨头坏死，为早期干预疾病发展提供帮助。

目录

声明

前言

1、材料与方法

1.1主要实验仪器、试剂及设备

1.2实验动物：

1.3动物模型的建立与处理

1.4观察指标与方法

2.1一般情况观察结果

2.2体重变化情况

2.3 凋亡显像结果比较：

2.4核磁显像结果

2.5 HE染色病理切片描述

2.6免疫组化结果

3、讨论

3.1激素性股骨头坏死动物模型的建立

3.2 99mTc-Cys-AnnexinV SPECT显像与MRI扫描的比较

3.3广枣总黄酮与股骨头坏死的关系

3.4本试验存在的一些问题

4、结论

参考文献

文献综述:股骨头坏死非手术治疗的研究进展

缩 略 语 表

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢