老年非心脏手术患者术后认知功能障碍与血浆circRNA-089763表达相关性研究

摘要

目的：术后认知功能障碍（Postoperative cognitive dysfunction,POCD）是一种老年患者术后神经系统疾病并发症，有研究发现circRNA与神经系统疾病的发生发展有关，但POCD的发生与circRNA的表达是否存在关系目前还不清楚。我们团队前期研究提示心脏冠脉搭桥术后发生POCD患者血浆外泌体中circRNA-089763表达水平明显增高，因前期研究中冠脉搭桥术患者来源受限，同时也未在非心脏手术患者中验证。故本研究旨在进一步扩大样本量以观察老年非心脏手术发生POCD患者血浆中circRNA-089763的表达水平是否也存在相同变化，为今后临床POCD的研究提供新的生物标志物及其机制探讨提供新线索。　　方法：采用前瞻性队列研究方法，随机选择2018年1月至2018年10月期间于我院行择期非心脏手术老年患者，术中维持有效的血液循环及适宜的麻醉深度。分别于术前1天、术后3天进行认知功能量表（简易智能精神状态评分(Mini-mental State Examination,MMSE)、数字颜色连线测验(Color Trail Test,CTT)、数字广度测试（Digital Span Test,DST）、画钟试验（Clock Drawing Test,CDT）、词汇流畅性测验（Verbal Fluency Test,VFT））测试，同期筛选20名健康志愿者作为对照组进行上述量表间隔三天的两次评估，使用“Z值法”判断所纳入患者是否存在术后认知功能障碍，并将其分为POCD组和NPOCD组（non-PCOD group），记录并比较患者基本资料、手术相关情况、术后VAS评分以及两次认知功能量表评分情况。分别于术前1天、术后3天采集外周静脉血，提取血浆总RNA，随机引物法反转录获得cDNA（Complementary DNA），以β-actin为内参基因，实时荧光定量聚合酶链式反应法（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）进行扩增，采用Delta-delta Ct法计算靶基因的表达水平，比较POCD组与NPOCD组circRNA-089763表达水平的差异，并分析POCD的发生与血浆circRNA-089763的相对表达水平是否具有相关性。　　结果：1.本实验最终有72例老年手术患者完成研究，其中骨科26例、胸科23例、胃肠23例，发生POCD患者22例，总体POCD发生率为30.56％。POCD组患者年龄较NPOCD组患者年龄大（t=5.971,P＜0.05），且随着年龄的增加发病率升高（x2=23.137,P＜0.05）；POCD组患者受教育年限较NPOCD组短（t=2.449,P＜0.05）；POCD组患者ASA分级较NPOCD组高（x2=14.726,P＜0.05）；两组患者性别、体重、身高、BMI差异无统计学意义（P＞0.05）。2.POCD组患者术中出血量较NPOCD组多（t=3.196,P＜0.05）；两组患者麻醉时间、手术时间、术中补液量比较无统计学差异（P＞0.05）。3.POCD组患者术后3天VAS评分较NPOCD组高（t=10.45,P＜0.05）；两组术后PCIA的使用率无统计学差异（x2=0.037,P＞0.05）。4.与术前1天比较，POCD组患者术后3天MMSE、DST、CDT、VFT评分降低，CTT评分升高（P＜0.05）；NPOCD组术后3天MMSE、DST、CDT评分降低，CTT评分升高（P＜0.05），VFT量表评分无统计学差异（P＞0.05）。与NPOCD组术后3d比较，POCD组患者MMSE、DST、CDT、VFT评分明显降低，CTT评分明显升高（P＜0.05）。两组术前各相应认知功能量表评分比较无统计学差异（P＞0.05）。5.两组患者术前1d和术后3d分别有65例血浆标本质量符合要求（260/280OD值（Optical Density,OD）＞1.80、总RNA含量≥1000ng）。两组OD值和RNA浓度比较均没有统计学差异（P＞0.05）。6.术后3天POCD组血浆circRNA-089763相对表达水平较NPOCD组明显升高2.41倍，差异有统计学意义（t=4.711,P＜0.05）；术前1d两组患者血浆circRNA-089763相对表达含量差异无统计学意义（P＞0.05）。7.术后第3天血浆circRNA-089763的相对表达水平与POCD的发生呈正相关（r=0.662,P＜0.05），术前血浆circRNA-089763的相对表达水平与POCD的发生不存在相关性（r=0.195,P＞0.05）；circRNA-089763术后第3天的相对表达水平与POCD组各神经量表Z值之和呈正相关（r=0.752,P＜0.05）。　　结论：1.老年非心脏手术患者POCD的发生与年龄、教育年限、ASA分级、术中出血量、术后疼痛有关。2.术后第3天血浆中circRNA-089763的相对表达水平与老年非心脏手术患者POCD的发生具有正相关性。

目录

前言

材料与方法

1 患者基本资料

1.1 纳入标准

1.2 排除标准

1.3 剔除标准

1.4 认知功能评估量表

1.5 POCD判断标准

1.6 实验技术路线

2.1 术前准备

2.2 麻醉过程

2.3 药品及仪器

4 收集指标

5 血浆circRNA-089763的检测

5.1主要器材及试剂

5.2 circRNA-089763检测方法

6 统计学方法

结果

1 纳入患者术前基本资料

2 手术基本情况

3 术后3天VAS评分

4 认知功能量表评分

4.1 志愿者认知功能量表评分情况

4.2 试验组认知功能量表评分情况

5 血浆总RNA提取质量

5.1 总RNA质量情况

5.2 溶解曲线及扩增曲线

6 血浆circRNA-089763相对表达水平

6.1 术前1d血浆circRNA-089763 检测情况

6.2 术后3d血浆circRNA-089763 检测

7 CircRNA-089763相对表达水平与POCD发生情况的相关性分析

7.1 circRNA相对表达水平与POCD发生的相关性分析

7.2 术后3d血浆circRNA-089763的相对表达水平与POCD组各神经量表Z值之和的相关性分析

讨论

1 患者基本情况与POCD

2 手术情况与POCD

3 术后疼痛与POCD

4 认知量表与POCD

5 CircRNA与POCD

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:circRNA在神经系统疾病中的研究进展

附表1：简易智能精神状态检查量表 （Mini-mental State Examination,MMSE）

附表2： 数字颜色连线测验 （Color trail test,CTT）

附表3： 数字广度测试表（Digital Span Test，DST）

附表4：画钟测验（Clock Drawing Test,CDT）

附表5：词汇流畅性测验（Verbal fluency test,VFT）

声明