恩度联合紫杉醇不同时序给药对移植瘤小鼠血清VEGF和HIF-1α水平影响的研究

摘要

目的：抗血管生成是肿瘤治疗的关键。目前与抗血管生成药物疗效相关的指标研究较少。国产重组人血管内皮抑素(recombinant humanendostatin，rh-endostatin，商品名:恩度)是我国首个抗血管生成靶向药物，其由大肠埃希菌工程菌发酵产物分离净化而来，并在原始血管内皮抑素(Endostatin)基础上添加了9个氨基酸残基，使其性状更稳定，活性更高。重组人血管内皮抑素通过抑制形成血管的内皮细胞迁移并诱导其凋亡等多种途径，阻断血管生成，从而达到抑制肿瘤增殖或转移的目的。研究表明，恩度与化疗联合给药时，给药时序不同，疗效也不同。血清血管内皮生长因子(vascular endothelial groth factor，VEGF)、缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)的水平变化与肿瘤的生长及转移密切相关，而其与抗血管治疗疗效关系研究较少。本研究通过建立Lewis肺癌细胞的小鼠移植瘤模型，动态观察恩度单药组及各恩度联合紫杉醇(paclitaxel，PTX)组移植瘤小鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子（HIF-1α）水平的变化及意义，探索血清VEGF、HIF-1α在抗血管生成治疗中的应用价值。　　方法：构建Lewis肺癌细胞C57/BL小鼠皮下移植瘤模型，并随机分为对照组（腹腔注射0.9％ NaCl，d1～d14）、单药PTX组(腹腔注射PTX，d1)、单药rh-endostatin组（腹腔注射rh-endostatin，d1～d14）、联合组1[腹腔注射rh-endostatin(d1～d14)+PTX(d1)]、联合组2[腹腔注射rh-endostatin(d1～d14)+PTX(d4)]和联合组3[腹腔注射rh-endostatin(d1～d14)+PTX(d7)]。各组给药后，动态测量小鼠移植瘤体积，各组于给药的第2、5、8、12、17天分别行酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测小鼠血清中VEGF和HIF-1α的水平，并行免疫组织化学法检测相应移植瘤组织中微血管密度（microvascular density，MVD）以及可反映微血管周细胞量的α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达水平，最后，高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)检测各紫杉醇给药组移植瘤组织中PTX的浓度。　　结果：个实验过程中，各组小鼠精神状态和饮食均正常，无明显消瘦及全身性不良反应。从用药的第2天开始，恩度单药组及各联合组小鼠血清中VEGF水平较对照组明显降低（P值均＜0.05）;从用药的第5天开始，恩度单药组及各联合组小鼠血清中HIF-1α水平也较对照组明显降低（P值均＜0.05）;而从第8天开始，恩度单药组血清VEGF、HIF-1α水平开始上升，与对照组差异消失（P值＞0.05）。在用药的第5天及第8天，恩度单药组及各联合组的肿瘤组织MVD较对照组明显降低(P值均＜0.05)，而α-SMA表达水平较对照组明显升高（P值均＜0.05）;而从第8天开始，恩度单药组肿瘤组织MVD开始升高，α-SMA表达水平下降，抗血管效应减弱。血清中VEGF水平变化较移植瘤组织微血管变化更快。在3个联合组中，联合组2移植瘤小鼠血清VEGF、HIF-1α持续低表达，且与对照组差异最显著（P值均＜0.01）。联合组2的小鼠移植瘤组织中PTX浓度明显高于另外2个联合组（P值均＜0.05），移植瘤体积也明显小于另外2个联合组（P值均＜0.05）。　　结论：移植瘤小鼠血清中VEGF、HIF-1α水平的变化与移植瘤组织微血管改变密切相关。单一恩度抗血管效应短暂，血清VEGF、HIF-1α水平的变化可反映抗血管效应的变化。在恩度用药期间，通过动态监测血清VEGF、HIF-1α的变化，可更早的发现肿瘤微血管结构的改变，在血清VEGF下降的初期联合给药可达到最佳的抗肿瘤效应。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 实验步骤

4 统计学分析

结果

1 各组小鼠移植瘤瘤体积比较

2 ELISA检测各组移植瘤小鼠血清VEGF、HIF-1α表达情况

3 免疫组化法检测各处理组小鼠移植瘤组织中MVD、α-SMA表达结果

4 各组小鼠移植瘤组织中PTX浓度的比较

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

抗血管生成药物的临床应用与现状 综述

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