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致谢
摘要
第一章文献综述
1．1烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的研究进展
1．1．1烟酰胺腺嘌呤二核苷酸概述
1．1．2烟酰胺腺曝呤二核苷酸的功能
1．1．3烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的合成方法研究进展
1．2烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶(NMNAT)的研究进展
1．2．1 NMNAT概述
1．2．2 NMNAT的功能
1．2．3 NMNAT的催化机理
1．3烟酰胺核糖苷激酶(NRK)的研究进展
1．3．1 NRK概述
1．3．2 NRK的催化机理
1．4本课题研究思路及主要内容
第二章烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶(NMNAT)的筛选
2．1引言
2．2实验材料与仪器
2．2．1主要的实验仪器及设备
2．2．2主要的实验材料及试剂
2．2．3主要的实验制剂及配制
2．3实验方法
2．3．1 NMNAT基因序列的选择
2．3．2重组大肠杆菌的构建
2．3．3工程菌的诱导表达与蛋白检测
2．3．4 NAD+标准曲线的建立
2．3．5粗酶液的催化活性检测
2．4实验结果
2．4．1基因的获取
2．4．2工程菌的蛋白表达
2．4．3 NAD+的标准曲线
2．4．4粗酶液的催化活性检测
2．5本章小结
第三章N-cva的诱导表达条件优化
3．1引言
3．2实验材料与仪器
3．2．1主要的实验仪器及设备
3．2．2主要的实验材料及试剂
3．3实验方法
3．3．3 N-cva的商密度发酵
3．4实验结果
3．4．2诱导温度对N-cva蛋白表达的影响
3．4．3诱导剂IPTG终浓度对N-cva蛋白表达的影响
3．4．4诱导时长对N-cva蛋白表达的影响
3．4．5工程菌N-cva的商密度发酵
3．5本章小结
第四章N-cva酶学性质研究及催化工艺优化
4．1引言
4．2实验材料与仪器
4．2．1主要的实验仪器及设备
4．2．2主要的实验材料及试剂
4．2．3主要的实验制剂及配制
4．3实验方法
4．3．1 NMN标准曲线的建立
4．3．2 N-cva的最适反应温度和温度稳定性
4．3．4 N-cva催化NMN和ATP制备NAD+的最佳反应温度
4．3．7 N-cva催化NMN和ATP制备NAD+的最佳反应酶底比
4．3．8酶蛋白的纯化
4．4实验结果
4．4．1 NMN的标准曲线
4．4．2 N-cva的最适反应温度
4．4．3不同温度下N-cva的稳定性
4．4．5不同pH下N-cva的稳定性
4．4．6 N-cva催化反应最佳温度
4．4．8 N-cva催化反应最佳缓冲液
4．4．9 N-cva催化反应最佳酶底比
4．4．10 N-cva的Ni-NTA纯化
4．5本章小结
第五章烟酰胺核糖苷激酶(NRK)的表达和催化工艺优化
5．1引言
5．2实验材料与仪器
5．2．1主要的实验仪器及设备
5．2．2主要的实验材料及试剂
5．3实验方法
5．3．1工程菌NRK的构建与菌种保存
5．3．2工程菌NRK的诱导表达与蛋白检测
5．3．3工程菌NRK的诱导表达条件优化
5．3．4 NR标准曲线的建立
5．3．5 NRK的催化活性检测
5．3．6 NRK催化NR和ATP制备NMN的反应条件优化
5．3．7 NRK和N-cva催化NR和ATP制备NAD+的工艺研究
5．4实验结果
5．4．1工程菌NRK的蛋白表达
5．4．2工程菌NRK的诱导表达优化
5．4．3 NR的标准曲线
5．4．4 NRK的催化活性检测
5．4．5 NRK催化NR和ATP制备NMN的反应条件优化
5．4．6 NRK和N-cva催化NR和ATP制备NAD+
5．5本章小结
6．1结论
6．2展望
参考文献
附录
个人简历
浙江大学;
