霍山石斛多糖精制工艺及其抗炎性质的研究

摘要

霍山石斛（Dendrobium huoshanense）是我省特有的传统名贵中药材，药食两用历史悠久，大量研究表明，霍山石斛对与高血糖、高血压、高血脂、肥胖症、脂肪肝等慢性代谢性疾病相关的炎性免疫具有调节功能，可有效改善身体健康状况。半仿生提取法，和阴离子交换树脂脱蛋白法生产成本低、易于放大，操作过程绿色安全，适合霍山石斛主要活性成分——霍山石斛多糖(DHP)的精制。
　　本文建立并优化了霍山石斛多糖精制工艺，并对通过该精制工艺制备的多糖进行化学成分分析和抗炎活性评价，主要研究内容及结果如下.
　　(1)霍山石斛有效成分半仿生法提取工艺的优化
　　采用单因素试验和正交试验优化了霍山石斛有效成分半仿生法提取工艺。优化工艺条件为:模拟胃液提取部分料液比1∶30，提取温度80℃，提取时间1.5h，模拟肠液提取部分料液比1∶30，提取温度80℃，提取时间2.5h。在此条件下多糖的得率为60.9±1.2mg/g，较传统水提法多糖得率提高了16.55％。
　　(2)霍山石斛多糖阴离子交换树脂脱蛋白工艺的优化
　　采用单因素试验和正交试验优化了霍山石斛多糖阴离子交换树脂脱蛋白工艺。优化条件为.pH8.5，温度35℃，缓冲液浓度0.02mol/L，多糖浓度0.8mg/mL的多糖溶液，体积流量为2BV/h，径高比为1∶9，最大上样量为40mL。
　　(3)霍山石斛多糖化学成分分析
　　采用HPLC法测定霍山石斛多糖分子量，乌氏粘度计测定多糖的粘度，PMP柱前衍生化法测定霍山石斛多糖单糖组成。霍山石斛精制多糖(DHP-2)与传统方法制备的霍山石斛多糖(DHP-1)相比，粘度更大，数均分子量(Mn)相差不大，DHP-2的重均分子量(Mw)要明显大于DHP-1的重均分子量，DHP-2的分子量分布更宽。两种多糖的单糖组成相同但各个单糖间摩尔比有差异。
　　(4)霍山石斛精制多糖抗炎活性评价
　　采用MTT法比较霍山石斛精制多糖对RAW264.7细胞生长的影响，通过RAW264.7细胞NO及IL-1β释放的情况和iNOS和IL-1βmRNA表达情况考察霍山石斛精制多糖的抗炎活性。结果表明，霍山石斛精制多糖能抑制炎症因子NO及IL-1β的分泌，降低iNOS和IL-1βmRNA的表达，相比而言，霍山石斛精制多糖的抗炎活性要优于传统方法制备的多糖。

目录

声明

致谢

摘要

一 绪论

1．1．1 传统提取方法

1．1．2 新兴提取技术

1．2 多糖脱蛋白的研究进展

1．3 霍山石斛及其多糖的药理活性研究

1．3．1 抗肿瘤活性

1．3．2 保肝活性

1．3．3 免疫活性

1．3．4 降血糖活性

1．4 课题研究内容概述

1．4．1 本论文研究的意义

1．4．2 课题研究技术路线

二 材料与方法

2．4．1 霍山石斛提取物的制备

2．4．2 霍山石斛有效成分提取工艺的优化

2．4．3 霍山石斛多糖阴离子交换树脂脱蛋白的研究

2．4．4 霍山石斛多糖化学成分分析

2．4．5 霍山石斛精制多糖抗炎活性研究

2．5 数据处理

三 结果与讨论

3．1．1 霍山石斛有效成分半仿生提取单因素实验

3．1．2 霍山石斛有效成分模拟胃液提取工艺优化

3．1．3 霍山石斛有效成分模拟肠液提取工艺单因素实验

3．1．4 霍山石斛有效成分模拟肠液提取工艺的优化

3．1．5 霍山石斛效成分半仿生提取工艺的应用

3．2 霍山石斛多糖阴离子交换树脂脱蛋白的工艺条件优化

3．2．1 阴离子交换树脂脱蛋白静态吸附单因素实验

3．2．2 阴离子交换树脂脱蛋白静态吸附正交试验优化

3．2．3 阴离子交换树脂脱蛋白动态吸附实验

3．2．4 阴离子交换树脂脱蛋白工艺的验证

3．3 霍山石斛多糖化学成分分析

3．3．1 霍山石斛多糖理化性质

3．3．2 霍山石斛多糖单糖组成

3．4 霍山石斛精制多糖抗炎活性研究

3．4．1 霍山石斛精制多糖对RAW264．7细胞生长的影响

3．4．2 霍山石斛精制多糖对RAW264．7细胞NO、IL-1β释放的影响

3．4．3 霍山石斛精制多糖对RAW264．7细胞iNOS、IL-1β mRNA表达的影响

四 结论

参考文献

攻读学位期间的学术活动及成果清单