粉末活性炭吸附法联合柱层析、超滤纯化藻蓝蛋白的试验比较研究

摘要

近年来从蓝藻中提取蛋白质、氨基酸和天然色素等己成为生物学、食品工程学、生命保健学等学科研究和开发的一个热点。由蓝藻细胞中提取的藻蓝蛋白运用十分广泛,它可作为荧光分子探针,也可作为食物和化妆品的营养成分和天然色素等。本研究以巢湖新鲜蓝藻藻泥为原料,通过冻融破壁的方法破碎藻细胞,获得藻蓝蛋白粗提液,然后用粉末活性炭吸附法粗提藻蓝蛋白,并在此基础上分别通过羟基磷灰石柱层析法和超滤法纯化藻蓝蛋白,以优化高纯度藻蓝蛋白的提取纯化工艺组合。
　　在粉末活性炭吸附法粗提藻蓝蛋白的试验研究中,首先对适合用于藻蓝蛋白纯化的粉末活性炭进行了种类、粒径的筛选,接着对粉末活性炭的粒径、添加量、PC浓度、吸附时间等条件进行了研究,最终确定了粉末活性炭吸附法粗提藻蓝蛋白的最佳处理条件,即煤质粉末活性炭,400～500目,藻蓝蛋白浓度1.0mg/mL,添加量100g/L,吸附时间15mm。
　　在超滤法纯化藻蓝蛋白的试验研究中,以粉末活性炭吸附法处理后的藻蓝蛋白溶液为原料,研究了不同截留分子量对藻蓝蛋白的纯化效果,接着对PC浓度、离心时间、离心转速等条件进行了研究,最终确定了超滤法提纯藻蓝蛋白的最佳条件,即截留分子量为10KDa、藻蓝蛋白浓度为045mg/mL、离心转速为4000g、离心时间为30mm。藻蓝蛋白的纯度可达到医药级标准(A620/A280＞3.0)。
　　在柱层析法纯化藻蓝蛋白的试验研究中,以粉末活性炭吸附法处理后的藻蓝蛋白溶液为原料,利用羟基磷灰石柱层析法纯化藻蓝蛋白,优选了洗脱液pH、洗脱液浓度作为单因素试验的因素,最终确定了羟基磷灰石柱层析法提纯藻蓝蛋白的最佳条件,即洗脱液pH值为7.0,洗脱液浓度为25mmol/L。藻蓝蛋白纯度可达到试剂级标准(A620/A280≥40)。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．1．1 巢湖流域概况

1．1．2 巢湖富营养化现状

1．1．3 国内外蓝藻资源化利用现状

1．2 研究意义

1．2．1 藻蓝蛋白的性质及应用

1．2．2 藻蓝蛋白提取纯化研究现状

1．2．3 现存的主要问题和不足

1．2．4 粉末活性炭吸附法粗提藻蓝蛋白新工艺

1．3 课题的提出

1．3．1 选题依据

1．3．2 研究内容

第二章 粉末活性炭吸附法粗提藻蓝蛋白

2．2．1 主要试验试剂与设备

2．2．2 试验方法

2．3 分析方法

2．4 结果与分析

2．4．1 不同种类与粒径粉末活性炭纯化效果

2．4．2 单因素试验

2．4．3 粉末活性炭吸附法正交试验结果

2．5 结论

第三章 超滤法纯化藻蓝蛋白

3．2．1 主要试验设备

3．2．2 试验方法

3．3 分析方法

3．4 结果与分析

3．4．1 截留分子量选择

3．4．2 单因素试验

3．4．3 超滤法处理正交试验结果

3．5 结论

第四章 柱层析法纯化藻蓝蛋白

4．2 试验部分

4．2．1 主要试验试剂与设备

4．2．2 试验方法

4．3 分析方法

4．4 结果与分析

4．4．1 单因素试验

4．4．2 粉末活性炭法联合HA柱层析法的试验结果

4．4．3 粉末活性炭—柱层析联合工艺光谱分析

4．5 结论

第五章 结论与建议

5．2 建议

参考文献