酿酒酵母工程菌株高效合成柠檬烯

目录

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第1章 文献综述

1.1 柠檬烯

1.1.1 萜类化合物概述

1.1.2 柠檬烯的理化性质

1.1.3 柠檬烯的生理活性

1.1.4 柠檬烯的市场应用前景

1.1.5 柠檬烯的制备方法

1.2 柠檬烯的生物合成途径

1.2.1 单萜化合物前体的生物合成途径

1.2.2 柠檬烯的生物合成途径

1.3 主要研究内容及意义

1.3.1 主要研究内容

1.3.2 研究意义

第2章 酿酒酵母合成柠檬烯途径重建

2.1 实验材料

2.2.1 实验所用菌株与质粒

2.1.2 实验所用试剂与仪器

2.1.3 本章所用引物

2.1.4 培养基

2.2 实验方法

2.2.1 一般PCR反应

2.2.2 重叠延伸PCR反应

2.2.3 表达载体构建及转化

2.2.4 大肠杆菌菌落PCR反应

2.2.5 大肠杆菌质粒提取

2.2.6 酿酒酵母转化方法

2.2.7 酿酒酵母菌落PCR方法

2.2.8 酿酒酵母基因组提取

2.2.9 发酵与检测方法

2.3 结果与讨论

2.3.1 柠檬烯合成酶同源性分析

2.3.2 共表达GPP合成酶和柠檬烯合成酶

2.3.3 共表达NPP合成酶和柠檬烯合成酶

2.3.4 NPP合成酶的筛选

2.4 本章小结

第3章 酿酒酵母合成柠檬烯途径优化

3.1 实验材料

3.1.1 实验所用菌株与质粒

3.1.2 实验所用试剂与仪器

3.1.3 本章所用引物

3.2 实验方法

3.2.1 融合蛋白构建方法

3.2.2 酵母细胞同源重组方法

3.2.3 发酵方法

3.2.4 柠檬烯提取及检测方法

3.2.5 细胞干重测定方法

3.2.6 鲨烯提取及检测方法

3.3 结果与讨论

3.3.1 蛋白质融合表达对柠檬烯合成的影响

3.3.2动态调控柠檬烯合成菌株中ERG20的表达

3.3.3补料碳源的优化

3.3.4补料分批发酵合成柠檬烯

3.4 本章小结

第4章 结论与展望

4.1结论

4.2展望

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

致谢