霍山石斛体内外抗Lewis肺癌作用研究

摘要

由于环境污染问题日益严峻、人们的营养失衡以及生活压力增大等因素，癌症已成为21世纪以来影响和威胁人类健康的第二大常见疾病，其中肺癌的发病率及死亡率最高，且其发病率仍具有增加趋势。中药是中华民族五千年灿烂文化的瑰宝，具有非常重要的地位。目前，运用中药和一些天然小分子物质来治疗癌症已经越来越受到医学界的青睐，从中药中寻找抗肿瘤部位及有效单体化合物已成为开发抗癌新药的途径之一。霍山石斛(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng，俗称米斛)作为中国历代本草记载中的特有名贵中草药，具有悠久的食用及药用历史，因此，探索霍山石斛中主要药效成分的潜在抗肿瘤功效具有重要意义。
　　目的:研究人工栽培霍山石斛体内外抗Lewis肺癌作用，确定人工栽培霍山石斛抗肿瘤有效部位、有效成分，探讨霍山石斛抗肿瘤机制，旨在为临床肺癌的治疗寻找新的高效、低毒的药物。
　　方法:1.霍山石斛各提取部位对Lewis肺癌细胞体外作用研究，包括(1)MTT法检测霍山石斛抑制Lewis肺癌细胞增殖的作用;(2)流式细胞术检测霍山石斛各提取部位对Lewis肺癌细胞的细胞凋亡、细胞周期变化的影响;2.霍山石斛各提取部位对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用研究，包括(1)小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的建立;(2)病理形态学观察各组小鼠生存状态，记录小鼠生理指标;(3)ELISA法检测Lewis肺癌小鼠血清中肿瘤相关免疫细胞因子的分泌;(4)小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验，流式细胞术检测霍山石斛各提取部位对小鼠脾脏细胞中免疫细胞变化的影响。
　　结果:1.霍山石斛枫斗经醇提、水提醇沉、酶解后分别获得醇提物、醇提后水提物及精制多糖，其提取率分别为20.44％、35.31％、18.45％。2.体外抗肿瘤实验表明霍山石斛茎有效部位对Lewis肺癌细胞均有抑制作用，醇提物在给药初期效果好，对Lewis肺癌细胞具有明显抑制;给药48h时各组抑制效果最明显，其中霍山石斛精制糖组抑制效果最佳，呈浓度依赖性显著升高;霍山石斛精制多糖组在给药48h后，与对照组相比凋亡细胞数目明显增多，大部分细胞周期被阻断，体外增殖受到抑制。3.抗肿瘤体内筛选实验表明，霍山石斛茎各有效部位均具有抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的作用，其中精制多糖组抑制作用最佳，灌胃高中低三种剂量，其抑瘤率分别为（64.52±3.54）％、（50.47±7.13）％、（37.68±5.17）％，与模型组比较存在显著差异(p＜0.05或p＜0.01);小鼠胸腺和脾脏的脏器指数的变化表明荷瘤小鼠机体免疫器官状况在一定程度上得到了改善，对机体内免疫系统损伤有一定的保护和促恢复作用;荷瘤小鼠免疫细胞因子分泌及流式免疫细胞分析结果表明霍山石斛各提取物可通过提高机体免疫功能，发挥机体正常的抗肿瘤免疫调节作用。
　　结论：通过霍山石斛体内外抗Lewis肺癌研究，筛选出具有明显抗肿瘤功效的霍山石斛精制多糖组，探讨了其通过一系列免疫调节发挥抗肿瘤作用，为霍山石斛抗肿瘤新药的研制以及临床应用提供了理论基础。

目录

声明

致谢

摘要

缩写词简表

1 绪论

1．1 肺癌的研究进展

1．1．1 肺癌的危害及分类

1．1．2 肺癌发病的原因

1．2 霍山石斛药理作用研究进展

1．2．1 增强抗肿瘤活性

1．2．2 降血糖功效

1．2．3 保肝功效

1．2．4 抗氧化作用

1．2．5 免疫调节作用

1．3 本文研究的目的意义

1．4 论文研究的研究内容、创新点及主要技术路线

1．4．1 研究内容

1．4．2 拟开展研究工作的创新性

1．4．3 主要技术路线

2 材料与方法

2．3 实验仪器

2．4 实验方法

2．4．1 霍山石斛各提取部位制备

2．4．2 霍山石斛茎各提取部位的理化性质分析

2．4．3 霍山石斛各提取部位对Lewis肺癌细胞体外作用研究

2．4．4 霍山石斛茎不同提取部位对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用

2．5 数据收集与统计分析

3 结果与分析

3．1 霍山石斛茎各提取部位的提取、分离

3．2 霍山石斛茎各提取理化性质分析

3．3 霍山石斛茎各提取部位对Lewis肺癌细胞体外作用研究

3．3．1 不同浓度霍山石斛各提取部位及不同作用时间对Lewis肺癌细胞增殖抑制的影响

3．3．2 流式细胞术检测霍山石斛茎不同提取部位对Lewis肺癌细胞凋亡的影响

3．3．3 流式细胞术检测霍山石斛茎不同提取部位对Lewis肺癌细胞周期的影响

3．4 霍山石斛茎不同提取部位对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用

3．4．1 荷瘤小鼠病理生理一般情况观察

3．4．2 Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤学研究

3．4．3 霍山石斛各提取物对Lewis肺癌荷瘤小鼠脏器指数的影响

3．4．4 ELISA法检测肿瘤标志物CEA及肿瘤相关细胞因子的分泌

3．4．5 霍山石斛各提取物脾淋巴细胞增殖实验

3．4．6 流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中免疫细胞变化情况

4 讨论

5 结论与展望

5．1 霍山石斛对小鼠Lewis肺癌细胞的体内外抗肿瘤作用

5．2 展望

参考文献

攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况