费约果叶片有效成分及其提取工艺的研究

摘要

费约果（Feijoa sellowiana Berg.）又名凤梨番石榴、巴西番石榴、无花果番石榴，系桃金娘科、费约果属常绿灌木或小乔木，起源于南美洲的巴西和乌拉圭。费约果叶片中主要成分为黄酮类物质和多酚类等水溶性成分。药理实验表明，费约果叶片具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫和抗炎等作用，其中黄酮和多酚类等水溶性成分为其主要有效成分。本研究通过对费约果叶片提取分离，得出费约果叶片里所含黄酮和多酚类等有效成分，再进行其抗氧化活性的研究，建立黄酮和多酚类等有效成分分析方法，进行其提取工艺的研究，并对有效成分产品的质量及急性毒性进行研究。主要研究内容和结果如下：　　采用柱层析、结晶等方法进行分离，利用 MS和1H-NMR，13C-NMR等波谱分析方法，对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果：分离并鉴定了5个化合物，经波谱学方法鉴定为：黄酮（1），β-谷甾醇（2），齐墩果酸（3），槲皮素（4）和萹蓄苷（5）。化合物3-5均系首次从该植物中分离得到。　　采用1,1-二苯基苦味基苯肼（DPPH·）自由基消除实验进行抗氧化和自由基消除活性的研究。抗氧化实验结果显示，费约果叶片的乙醇提取物、水提取物、槲皮素（4）和萹蓄苷（5）具有较强的抗氧化和自由基消除活性。　　研究费约果叶片槲皮素提取工艺，优选最佳提取条件。以提取率、槲皮素收率和槲皮素纯度为指标，采用单因素试验法，考察提取溶剂、提取温度、提取时间、料液比和提取次数对费约果槲皮素收率的影响，优选出最佳提取工艺条件。结果：最佳槲皮素提取工艺：在50℃条件下，将费约果叶片粉末置于10倍90％乙醇中回流提取4次，每次2 h，提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度分别为：3.49%、0.033%、0.95%。　　以提取率、总黄酮收率和总黄酮纯度为指标，采用单因素试验法，考察提取溶剂、提取温度、提取时间和提取次数对费约果叶片总黄酮收率的影响，再进行正交试验，优选出最佳提取工艺条件。得出最佳总黄酮提取工艺：90℃条件下，将费约果叶片粉用水回流提取三次，每次2 h，料液比（g/mL）分别为第一次1:10，第二次第三次料液比为1:5。提取率、总黄酮收率、总黄酮纯度分别为：16.23%、6.90%、42.51%。　　为研究费约果叶片提取物的产品质量，本文对费约果叶片提取物中总黄酮、槲皮素、黄酮、维生素 C、矿物质和重金属的含量进行了测定。采用薄层色谱法对费约果叶片提取物进行了定性分析。采用紫外分光光度法测定费约果叶片提取物中总黄酮含量，结果表明总黄酮含量为52.6%。采用高效液相色谱法对费约果叶片提取物中槲皮素和黄酮的含量进行测定。结果表明槲皮素含量为0.21%，黄酮含量为2.77%。采用碘滴定法测定费约果叶片提取物中维生素C含量，其结果为0.93%。采用电感耦合等离子体法对费约果叶片提取物进行了矿物质和重金属的检测，其结果表明其中含有多种矿物质，如K、Fe、Zn、Mg、Ca等，并且其重金属含量，如 As、Hg、Pb、Cu等均符合国家标准。　　为研究费约果叶片提取物的产品急性毒性，采用最大耐受剂量（MTD）试验法，将10000 mg/kg.BW剂量的费约果叶片提取物灌胃小鼠后，在连续14 d的试验期内，小鼠活动正常，没有发现明显的中毒现象，小鼠也均未死亡。试验期满后，处死小鼠，进行大体解剖，没有发现肝、肺、肠、胃、肾脏等主要器官产生可见的异常变化。初步判定费约果叶片提取物无急性毒性。

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1 绪论

1.1 费约果概况

1.2 费约果的国内外研究现状

1.3 费约果的应用价值

1.4 黄酮和多酚类的提取分离研究

1.5 本研究的目的意义

1.6 本研究的主要内容

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

3 结果与分析

3.1 费约果叶片有效成分的分离

3.2 费约果叶片抗氧化活性测试

3.3 费约果叶片槲皮素的提取工艺研究

3.4 费约果叶片总黄酮的提取工艺研究

3.5 费约果叶片提取物的产品质量鉴定

3.6 费约果叶片提取物的产品急性毒性试验

4 讨论

4.1 费约果叶片有效成分的分离

4.2 费约果叶片抗氧化活性测试

4.3 费约果叶片槲皮素的提取工艺研究

4.4 费约果叶片总黄酮的提取工艺研究

4.5 费约果叶片提取物的产品质量鉴定

4.6 费约果叶片提取物的产品急性毒性试验

结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文及研究成果