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【6h】

胸水p16基因纯合性缺失的检测及其临床意义

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目录

英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 Hela细胞培养

1.2 Hela细胞总RNA的制备(异硫氰酸法)

1.3 mRNA的制备(oligo(dT)层析法)

1.4 cDNA第一链的合成以及RT-PCR

1.5 p16第二外显子cDNA PCR产物的纯化

1.6 pGEMT质粒与p16第二外显子cDNA连接

1.7感受态细胞的制备和转化

1.8质粒提取及定量

1.9阳性克隆鉴定

1.9.1重组质粒DNA酶切图谱分析

1.9.2 DNA序列分析

1.10 p16基因第二外显子cDNA的制备及纯化

1.11 p16基因第二外显子cDNA探针的标记

1.12 p16基因第二外显子Southern Blotting方法的建立

1.13胸水DNA的制备

2 结果

2.1 pGEM-p16克隆的构建及其p16基因第二外显子纯合性缺失PCR分析方法的建立

2.1.1 pGEM-p16重组质粒的限制性内切酶酶切图谱分析

2.1.2 DNA序列分析

2.1.3 p16基因第二外显子cDNA的制备

2.1.4 Southern blot结果

2.1.5 p16基因第二外显子纯合性缺失PCR分析方法的建立

2.2临床胸水标本p16、p15基因纯合性缺失的分析

2.2.1癌性胸水中多肿瘤抑制基因(p16、p15)基因纯合性缺失率

2.2.2多肿瘤抑制基因(p16、p15)基因纯合性缺失和其他确诊方法

2.2.3 31例癌性胸水p16基因第二外显子纯合性缺失情况

3 讨论

3.1 pGEM-p16克隆的构建及其p16基因第二外显子纯合性缺失PCR分析方法的建立

3.1.1 pGEM-p16克隆的构建

3.1.2 p16基因第二外显子纯合性缺失PCR分析方法的建立

3.2 p16基因的作用及其在肺癌、癌性胸水中的研究意义

3.2.1 p16基因在细胞周期中作用

3.2.2 p16基因研究在肺癌及癌性胸水中的临床意义

4 结论

参考文献

对本课题的进一步设想

致谢

个人简历

在学期间的研究成果目录

综述-p16基因与肺癌关系的研究进展

1 p16基因在细胞周期中的作用

2 p16基因异常与肺癌的发生和发展

2.1 p16基因缺失与肺癌

2.2 p16基因点突变与肺癌

2.3 p16基因甲基化与肺癌

3 p16基因与肺癌基因治疗研究

4 p16的临床研究进展

5 结语

参考文献

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摘要

目的:建立多肿瘤抑制基因(MTS1或p16基因)纯合性缺失分析方法,探讨胸水p16基因纯合性缺失检测的临床意义.结论:该研究表明胸水p16基因第二外显子纯合性缺失的检测对癌性胸水诊断特异性高(100﹪),无假阳性,与胸水细胞学联合检测可增加诊断的阳性率,并可补充和提高胸水细胞学的诊断价值.

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