弓形虫信号转导蛋白14-3-3和主要膜表面抗原SAG1基因的克隆、表达及免疫学诊断

摘要

目的:体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白14-3-3(Toxo14-3-3)和膜表面主要抗原SAG1编码基因,克隆至原核表达载体pET28a,并表达出Toxo14-3-3和SAG1重组蛋白.利用此重组蛋白,探讨rToxo14-3-3和rSAG1用于诊断弓形虫感染的价值.方法:收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA,逆转录生成cDNA,然后以其为模板扩增出Toxo14-3-3、SAG1编码基因,将扩增产物克隆入原核表达载体pET28a.在原核细胞表达Toxo14-3-3、SAG1重组蛋白.重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌BL21,并以IPTG诱导表达.制备、纯化rToxo-14-3-3和rSAG1蛋白抗原,利用纯化的rToxo-14-3-3和rSAG1抗原,间接ELISA法探讨其诊断弓形虫病的价值.结论:成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了14-3-3基因和SAG1基因,构建了pET28a/Toxo14-3-3和pET28a/SAG1重组质粒,并获得了高效表达,间接ELISA及Western-blot表明,rToxo-14-3-3在急慢性弓形虫感染诊断中具有实用价值.该研究为弓形虫病的免疫学诊断和蛋白质疫苗的研究创造了条件.

目录

中英文词对照表

1前言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

3实验结果

4讨论

5结论

6参考文献

附录一

附录二：个人简历

附录三：致谢

附录四：综述