丙型肝炎病毒NS4蛋白的克隆、表达和抗原性分析

摘要

丙型肝炎病毒的基因组是一条9.4kb的单股正链RNA分子.HCV-NS4A编码二个病毒多肽:NS4A和NS4B.HCV-NS4A蛋白作为一种非结构形式,主要的生物学功能是作为NS3丝氨酸蛋白酶的辅助因子,在HCV多蛋白的成熟过程中发挥着重要的调节作用;NS4B的功能目前尚无确切资料.我们克隆了NS4区部分基因,进行了表达、纯化,研究了NS4抗原的作用特点.该课题分以下三部分进行:第一部分:丙型肝炎病毒NS4片段的克隆:以HCV-J质粒为模板,设计引物,经PCR扩增获取NS4基因片段(4U4D);将PCR产物克隆到PMD18-T中,再将该片段用BamHI和KpnI双酶切定向克隆到PQE30载体中,构建PQE30-4U4D重组质粒.经酶切、测序鉴定,目的基因克隆结果正确.第二部分:丙型肝炎病毒Ns4基因片段的原核表达与纯化:将PQE30-4U4D重组质粒导入M15菌,培养、IPTG诱导、离心、收集菌体、超声粉碎、粗纯化,12％SDS-PAGE对培养物分析表达相对分子量Mr约25KD的可溶性蛋白,其氨基端有6个组氨酸,以Ni-NTA柱亲和层析纯化.第三部分:丙型肝炎病毒NS4基因片段表达产物的抗原性分析:以NS4纯化蛋白产物为抗原包被酶标板,ELISA结果显示:NS4抗原在大部分阳性标本中其反应性相对最强,说明NS4蛋白在HCV感染中具有诊断价值.

目录

英文缩略词表

前言

第一部分丙型肝炎病毒 NS4部分基因的克隆

1、材料和方法

2、结果

3、讨论

第二部分目的基因的原核表达及鉴定

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第三部分基因工程丙型肝炎病毒 NS 4-4U4D蛋白基因抗原性分析

总结

参考文献

附录

致谢

综述丙型肝炎病毒研究动态及其非结构蛋白（NS4A）研究进展