落叶松启动子元件挖掘及基因组编辑实现

目录

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第一章绪论

1.1.1 落叶松概述

1.1.2 落叶松分子生物学进展

1.1.3 落叶松基因组工程研究

1.2 植物原生质体转化进展

1.2.1 原生质体特性及转化应用

1.2.2 原生质体分离纯化方法

1.2.3 原生质体瞬时转化方法

1.3.1 植物转录调控元件分类

1.3.2 植物启动子元件主要类别及应用

1.3.3 植物启动子元件分离及鉴定方法

1.4 植物 CRISPR-Cas9基因组编辑系统

1.4.1 CRISPR-Cas9工作原理简介

1.4.2 CRISPR-Cas9植物基因组编辑系统核心元件

1.5 立题依据

1.6 研究内容

第二章材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 工程菌株

2.2 实验试剂

2.3 实验仪器

2.4 实验方法

2.4.1 落叶松胚性愈伤组织诱导培养

2.4.2 落叶松原生质体细胞计数及活性检测

2.4.3 落叶松原生质体制备及转化

2.4.4 落叶松基因组 DNA提取

2.4.5 落叶松基因组及转录组通量测序

2.4.6 落叶松候选启动子元件分离及报告载体构建

2.4.7 落叶松 CRISPR-Cas9 基因组编辑载体构建

2.4.8 水稻原生质体制备及转化

2.4.9 水稻稳定遗传转化

3.1.1 落叶松愈伤组织诱导培养

3.1.2 落叶松原生质体分离制备关键参数优化

3.1.3 落叶松原生质体瞬时转化关键参数确定

3.1.4 落叶松原生质体瞬时转化方法

3.2 落叶松启动子元件挖掘及鉴定

3.2.1 基于通量测序技术的落叶松高效候选启动子挖掘

3.2.2 落叶松候选启动子关键元件分析

3.2.3 落叶松候选启动子分离鉴定

3.2.4 落叶松候选启动子转录活性比较分析

3.2.5 落叶松启动子在植物基因组工程中的应用

3.3 基于 CRISPR-Cas9的落叶松基因组编辑实现

3.3.1 落叶松目标基因序列确认

3.3.2 落叶松 CRISPR-Cas9 向导 RNA设计

3.3.3 落叶松基因组编辑事件分析及确认

4.1 落叶松原生质体瞬时表达体系有效建立及优化

4.2 落叶松启动子元件有效挖掘策略及应用

4.3 落叶松 CRISPR-Cas9 基因组编辑体系建立及优化

第五章结论

致谢

参考文献

攻硕期间取得的研究成果