Survivin、COX-2与胆管癌的血管生成及COX-2途径对胆管癌细胞血管生成相关因子影响的实验研究

摘要

胆管癌是胆道常见的恶性肿瘤，虽然在胆管癌诊治方面取得一些进展，但其预后仍较差，其中重要的原因是早期诊断困难，而当疾病处在进展期时，肿瘤细胞往往已通过血道、淋巴转移，从而导致外科根治性切除率低。随着血管生成在肿瘤发生、发展及预后中作用和地位的确立，抗肿瘤血管生成策略成为目前肿瘤治疗研究的热点。既往认为胆管癌是一种血管分布(相对肝癌)较少的肿瘤，但随着对胆管癌形成分子机制研究的深入，血管生成在胆管癌发生发展中的重要性已逐步被重视。Survivin是一种结构独特的凋亡蛋白抑制因子家族的成员，特异地表达于人和鼠的胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞。研究表明，Survivin在细胞凋亡和细胞周期的基因调控中发挥重要作用，而且在肿瘤血管新生调节中是至关重要的，使其成为一个非常有吸引力的癌症治疗靶点；环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素生物合成的限速酶，大量研究表明COX-2表达增强与多种肿瘤的发生发展有关，COX-2上调可能是肿瘤发生过程中一个重要的限速步骤，COX-2可能通过促进肿瘤细胞增殖和抑制细胞凋亡、促进肿瘤恶性转化、促进肿瘤血管生成等机制参与肿瘤的发生发展；关于Survivin和COX-2在肿瘤血管生成角色方面的报道并不多见。我们前期的研究发现Survivin和COX-2基因参与了胆管癌细胞增殖和凋亡过程，本实验欲了解Survivin、COX-2与胆管癌血管生成的关系及胆管癌血管生成的可能机制，为胆管癌的抗肿瘤血管生成治疗提供新依据。 目的：研究Survivin、COX-2与胆管癌血管生成的关系及胆管癌血管生成的可能机制。 方法：采用SP免疫组化染色检测Survivin、COX-2、VEGF和MVD在胆管癌临床病理标本中的表达。胆管癌细胞株QBC939于体外培养，每日倒置显微镜下观察细胞生长情况。应用不同浓度的选择性环氧合酶-2 抑制剂尼美舒利分别处理细胞，于作用的不同时间收集细胞，应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunoadsordent assay，ELISA)检测药物处理前后培养细胞上清液中分泌的VEGF浓度；应用RT-PCR检测药物处理前后胆管癌细胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin基因的表达变化；采用SP免疫组化染色观察药物处理前后胆管癌细胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin蛋白的表达情况。 结果： (1)免疫细胞化学结果显示胆管癌组织 MVD 值、COX-2、VEGF和Survivin阳性表达率显著高于正常胆管组织(P<0.05)；(2)胆管癌组织COX-2基因的表达与VEGF表达、MVD值成正相关；(3)胆管癌组织Survivin基因表达与VEGF表达、MVD值成正相关；(4)ELISA表明随着尼美舒利浓度增加，胆管癌细胞QBC939上清液中分泌的VEGF浓度下降；(5)免疫组化测定显示随着尼美舒利浓度增加，COX-2、VEGF和Survivin在QBC939细胞浆中表达下调；(6)RT-PCR测定显示随着尼美舒利浓度增加，COX-2、VEGF和Survivin在QBC939细胞核中表达下调。 结论： (1)Survivin和COX-2在胆管癌中高度表达可能与胆管癌血管发生有密切联系；(2)选择性COX-2抑制剂尼美舒利对体外培养的胆管癌细胞株QBC939的血管生成相关因子有抑制作用，呈剂量依赖性和时间依赖性，并且可能通过COX．2途径发挥其抗肿瘤血管生成作用。

目录

论文说明：中英文名词对照表

声明

前言

第一部分：Survivin、COX-2与胆管癌的血管生成关系的实验研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第二部分：COX-2途径对胆管癌细胞血管生成相关因子影响的实验研究

1.材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨论

全文总结

进一步研究方向

参考文献

附录

致谢

综述 胆管癌与抗肿瘤血管生成