水杨酸活化人卵巢癌细胞AMPK/TSC2下调mTOR的促生长作用

摘要

背景与目的：　　卵巢癌（ovarian carcinoma）是女性生殖道恶性肿瘤中致死率最高的肿瘤。由于卵巢癌的特性，患者预后往往较差、复发率较高，是威胁女性生命健康的严重问题。现有研究证实，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian Target of Rapamycin, mTOR）在卵巢癌组织中高表达。mTOR异常活化在恶性肿瘤发生、发展中发挥重要作用，mTOR具有抗凋亡、促进癌细胞生长的作用。而腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated kinase，AMPK）可以通过直接磷酸化结节性硬化症2（Tuberous Sclerosis Complex2，TSC2）苏氨酸上1345位点激活TSC2，形成TSC1/TSC2复合物，从而抑制mTOR活性。有研究表明，水杨酸可以直接活化AMPK/TSC2，进而下调mTOR的表达与活化，最终抑制癌细胞的生长。因此，我们设想水杨酸对人卵巢癌细胞具有生长抑制作用。　　本实验通过研究水杨酸对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用及对AMPK、TSC2和mTOR蛋白表达和活化的影响，旨在探讨水杨酸是否可以活化人卵巢癌AMPK/TSC2下调mTOR的促生长作用，以期为卵巢癌的药物治疗提供新的思考方向。　　方法：　　1、结晶紫法筛选水杨酸的浓度区间，测定水杨酸诱导人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞72小时后细胞的存活率；　　2、结晶紫法测定顺铂和紫杉醇对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用。并比较水杨酸分别联合顺铂/紫杉醇与单用顺铂/紫杉醇对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用；　　3、Western Blot测定经水杨酸（IC20/IC50值）、顺铂（IC20/IC50值）和水杨酸联合顺铂（SA-IC20+DDP-IC50）分别作用人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞24小时后AMPK、TSC2和mTOR的表达和活化水平。　　结果：　　1、水杨酸以剂量依赖方式抑制人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长。水杨酸作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后的IC50分别为：3.870±0.270 mmol/L和3.030±0.240 mmol/L。　　2、顺铂和紫杉醇作用于 A2780和SKOV-3细胞72小时后的IC50分别为：6.980±0.538μmol/L和6.18±0.440μmol/L，0.018±0.001μmol/L和0.023±0.002μmol/L。水杨酸（IC20）分别联合不同浓度紫杉醇和顺铂作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后，顺铂和紫杉醇的IC50分别为：3.180±0.190μmol/L和2.690±0.160μmol/L，0.008±0.001μmol/L和0.010±0.001μmol/L，剂量增强因子（Dose Enhance Factor，DEF）分别为：0.44和0.43,0.46和0.44。结果显示：与单用紫杉醇或顺铂相比，经水杨酸联合作用后细胞的生长抑制更加明显（P<0.05），提示水杨酸可增加顺铂或紫杉醇的生长抑制作用。　　3、水杨酸可促使人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞中AMPKαThr172和TSC2Ser1387磷酸化水平升高，并显著下调p-mTOR Ser2448的表达（P<0.05）。　　结论：　　1、水杨酸可以协同增加顺铂或紫杉醇对人卵巢癌细胞的生长抑制作用。　　2、水杨酸可活化人卵巢癌细胞AMPK/TSC2下调mTOR的促生长作用，可能为改善临床卵巢癌化学治疗效果提供了一个新的方向。

目录

英文缩写词对照表

引言

2.1 材料

2.1.1实验细胞

2.1.2实验试剂

2.1.3 主要实验仪器与设备

2.1.4主要实验耗材

2.1.5主要溶液配制

2.2 方法及技术路线

2.2.1 实验流程图

2.2.2细胞复苏、培养、传代和接种

2.2.3 药物配制

2.2.4 结晶紫法测定药物作用后的人卵巢癌细胞存活率及其IC20和IC50

2.2.5 Western Blot法检测经水杨酸和顺铂作用后人卵巢癌细胞目标蛋白的表达水平

2.2.6 统计学方法

2.3结果

2.3.1 水杨酸对人卵巢癌细胞的生长抑制作用

2.3.2顺铂单药及联合水杨酸对人卵巢癌细胞的生长抑制作用

2.3.3紫杉醇及其联合水杨酸对人卵巢癌细胞的生长抑制作用

2.3.4水杨酸对人卵巢癌细胞AMPK、TSC2和mTOR蛋白表达和活化的影响

2.4讨论

2.5结论

2.6问题与展望

致谢

参考文献

综述: 水杨酸抗肿瘤机制研究进

附录一：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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