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第一章 植物PPR蛋白的研究进展
1.1 PPR蛋白的进化
1.2 植物PPR蛋白的结构特点及类型
1.3 植物PPR蛋白的定位
1.4 植物PPR蛋白调控细胞器基因的表达
1.4.1 植物PPR蛋白调控线粒体基因的表达
1.4.2 PPR蛋白调控叶绿体基因的表达
1.4.3 植物PPR蛋白参与胚胎发育
1.5 Designer PPR蛋白研究进展
1.5.1 PPR蛋白特异性识别RNA序列的结构基础
1.5.2 PPR蛋白作为RNA结合工具操纵基因表达的策略
1.5.3 Engineer PPR蛋白质操纵基因表达
1.5.4 Engineer PPR蛋白的优势及前景展望
第二章 转录后基因沉默及其应用研究进展
2.1 转录后基因沉默现象的发现及定义
2.2 转录后基因沉默的分子机制
2.2.1 转基因转录后基因沉默(transgene-PTGS)的触发
2.2.2 转录后基因沉默的途径
2.2.3 转录后基因沉默途径的核心成员
2.3 转录后基因沉默的调控
2.4 PTGS在植物中的应用
2.4.1 植物基因功能的研究
2.4.2 植物遗传改良的应用
2.4.3 抗病毒研究
2.4.4 抗病虫研究
第三章 材料与方法
3.1 实验材料及生长条件
3.2 菌株和质粒
3.2.1 菌株
3.2.2 质粒
3.3 抗生素和主要试剂
3.4 Gateway体系构建质粒
3.5 大肠杆菌与农杆菌转化
3.6 质粒抽提
3.7 转基因植株的构建
3.8 拟南芥的杂交
3.9 叶绿素含量测定
3.10 DNA提取和聚合酶链式反应（PCR）
3.11 植物总RNA提取、反转录以及定量PCR
3.11.1 植物总RNA提取
3.11.2 半定量RT-PCR和定量qRT-PCR
3.12 拟南芥原生质体分离和转化
3.12.1 拟南芥原生质体分离
3.12.2 拟南芥原生质体转化
3.13 EMB1270蛋白亚细胞定位观察
3.14 酵母双杂交相互作用蛋白鉴定
3.15 Northern blot分析
3.16 叶绿素荧光测定
第四章 实验结果
4.1 拟南芥PPR蛋白EMB1270调控叶绿体发育的分子机制研究
4.1.1 emb1270突变体鉴定和表型分析
4.1.2 EMB1270编码一个叶绿体定位的PPR蛋白
4.1.3 EMB1270参与叶绿体内含子的剪接
4.1.4 EMB1270与质体剪接因子CFM2和CAF1之间的相互作用
4.1.5 EMB1270突变抑制var2的斑叶表型以及质体rRNA加工
4.1.6 EMB1270调控叶绿体发育机制的讨论
4.2 胚胎致死型PPR蛋白功能研究方法
4.2.1 在野生型背景下过表达EMB2279的突变版本导致叶片黄化
4.2.2 35S:sot5-m/Col的黄化表型依赖于RDR6介导的转录后基因沉默途径
4.2.3 运用共抑制机理研究胚胎致死型PPR蛋白的功能
4.3 讨论
4.3.1 在野生型背景下过表达突变的PPR基因序列可获得呈现明显
4.3.2 一些过表达截短的PPR序列的转基因植株不出现共抑制表型
4.3.3 ClpP1和Ycf3的功能丧失可能是EMB976敲除突变体中胚胎发育缺陷的原因
参考文献
附录
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
上海师范大学;
