膝关节腔内同种异体脱钙骨复合软骨细胞\骨髓间充质干细胞组织工程软骨培养的试验研究

摘要

目的：研究以关节腔作为组织工程软骨培养环境的可行性；并明确骨髓间充质干细胞在组织工程软骨培养中的作用。 材料与方法：新西兰大白兔90只，月龄6~8个月，体重2.5~4.0kg，雄性。随机分为A、B、C三组，每组30只。A组为单纯脱钙骨组，30只动物膝关节腔内分别植入骨膜包裹的脱钙骨，于第8w，10w，12w各取10只标本观察；B组为脱钙骨+软骨细胞组，将体外培养好的同种异体关节软骨负载在脱钙骨载体上，骨膜包裹后植入30只动物的关节腔内，分别于第8w，10w，12w各取10只标本观察；C组为脱钙骨+软骨细胞与骨髓间充质干细胞共培养组，将体外培养的同种异体关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养24h后，负载在脱钙骨基质上，骨膜包裹后植入30只动物的膝关节腔内，并分别于第8w，10w，12w各取10只标本观察。移植手术在显微操作下进行骨膜包裹和关节腔缝合固定。术后标本观察采用H-E染色和甲苯胺蓝染色观察软骨细胞的状态和活性，并记录每高倍镜(10x40)下标本中甲苯胺蓝染色阳性的软骨细胞个数；细胞个数记录以每个标本三人分别观察计数后取平均值。数据录入和分析采用SPSS v14.0版统计学软件。计量资料以均数±标准差(x±s)表示。不同处理的组间比较采用One-way ANOVA并进行One-wayANOVA Post Hoc Tests(Dunnett)进行组间比较。 结果： c组(脱钙骨+软骨细胞+骨髓间充质干细胞共培养组)：HE染色移植8周后软骨细胞已开始增生，细胞代谢活跃，胞体增大，核染色增强；12周时已呈透明软骨样，软骨陷窝形成，周围大量细胞基质围绕；已见不到明显的载体结构。甲苯胺蓝染色8周软骨细胞已开始增生，细胞代谢活跃，胞体增大，大多数细胞核染色呈紫蓝色；已有少量基质分泌。12周时甲苯胺蓝染色阳性细胞明显多于A、B组，细胞排列成串状或团状，细胞核染色呈深蓝色，软骨陷窝形成。B组(脱钙骨+软骨细胞组)和A组(单纯脱钙骨组)：HE染色8周时标本中只见少量的移植细胞分散排列在载体结构内，大部分标本中细胞开始萎缩，载体结构完整。B组12周时载体内软骨细胞增殖较弱，软骨细胞大部分呈三角形或梭形，排列稀疏。软骨细胞分泌的软骨基质较少，呈网状分布，未融合成片，未见成熟软骨陷窝形成。甲苯胺蓝染色12周时B组标本载体内软骨细胞数量少，单个排列，排列稀疏，核染色较淡，无软骨陷窝形成。A组中12周时绝大多数标本细胞偶可见核染色深蓝色的软骨细胞。各组甲苯胺蓝染色阳性细胞计数，8w，10w，12w周时统计结果显示C组均明显多于A、B组，有显著统计学差异(p<0.01)。 结论：膝关节腔是组织工程软骨理想的培养环境，“腔内培养，腔内移植”的理念具有可行性，为组织工程软骨的发展提供了新的思路。

目录

论文说明:英文缩略词表

声明

摘要

1.引言

2.材料与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献:

附录

致谢

综述:组织工程软骨修复软骨缺损的问题探讨及体内培养环境研究进展

附图