自体骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质修复兔关节软骨缺损的初步研究

摘要

目的：体外培养兔自体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)并向软骨细胞表型分化,探讨其与兔同种异体脱钙骨基质(decalcified bone matrix，DBM)体外相结合培养的可行性，为下步将细胞支架复合物植入兔膝关节软骨缺损处修复关节软骨缺损做准备。方法：抽取兔股骨骨髓液，分离纯化骨髓液中的间充质干细胞。取扩增传代至第3代的BMSCs分成实验组和对照组，实验组用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、地塞米松和抗坏血酸联合诱导，在诱导4天、7天，14天后，分别用甲苯胺蓝染色检测细胞蛋白多糖的表达，Ⅱ型胶原免疫组化染色检测细胞Ⅱ型胶原的表达并计算阳性率;对照组用含10％胎牛血清的LG-DMEM培养液自然分化。制备兔DBM，采用液体置换法检测经脱钙2天、3天、4天支架材料的孔隙率。扫描电镜观察DBM的超微结构，以及DBM与细胞体外结合培养3天的粘附情况。结果：BMSCs易获得，体外培养生长稳定，细胞活性良好。实验组BMSCs向软骨细胞表型转化。细胞甲苯胺监染色异染，Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性率与对照组相比有显著性差异。脱钙3天的DBM多孔结构及空隙适合细胞的粘附和增殖。细胞和DBM体外培养粘附好。结论：兔自体BMSCs米源丰富,细胞活性好，经体外诱导后可以向软骨细胞表型转化。兔同种异体DBM制备方便，具有良好的特性，两者结合培养粘附好,为进一步体内实验做好准备。