临床分离鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药性检测和耐药基因研究

摘要

引言：环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星等氟喹诺酮类药物常用于革兰阴性杆菌感染的治疗，随着该类药物临床应用的增多，近年来鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药越来越严重。实验证实，鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物耐药的主要机制有两种，一是氟喹诺酮类药物靶位的改变；二是细胞膜通透性的改变或（和）泵出机制的过分表达。且细菌耐药性可以通过垂直或水平传播等方式进行播散。本研究通过对安徽医科大学第一附属医院分离的鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类抗菌药物的耐药性分析，对常见耐药基因的检测，了解本地区鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类抗菌药物的耐药情况，探讨细菌耐药的分子生物学机制，为本地区开展鲍曼不动杆菌感染的防治、耐药的监测、传染源的追踪及传播途径调查等工作提供实验室依据。
　　 目的：调查医院临床分离的鲍曼不动杆菌的分布和耐药性，了解鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类抗菌药物的常见耐药基因型别和分子机制，为临床抗感染治疗提供依据，以指导临床合理用药。
　　 方法：采用VITEK系统鉴定细菌，采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药物敏感试验，并用M-H琼脂定量稀释法测定菌株对左氧氟沙星、环丙沙星和加替沙星三种氟喹诺酮类药物的MIC，PCR扩增gyrA基因、parC基因和质粒上的qnrA、B、S、氨基糖苷类修饰酶aac(6’)-Ib及外排泵qepA基因，选取部分PCR扩增产物进行测序分析。结果按照美国临床实验室标准化委员会(CLSL/NCCLS2008版) 标准进行判断。应用 WHONET 5.3软件分析临床标本所分离的病原菌的分布情况和药敏结果。
　　 结果：从2007年10月到2009年10月，临床标本共检出120株鲍曼不动杆菌，多重耐药鲍曼不动杆菌占临床分离鲍曼不动杆菌的80.0％(96/120)，中心重症监护室(ICU)、呼吸科病房、急救中心分离菌所占比率分别为28.3％、24.2％、12.5％。鲍曼不动杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星的耐药率分别为78.3 ％、58.3 ％和40.0％。PCR基因扩增和测序结果：所有菌株均扩增出了相应gyrA和parC基因产物，氨基糖苷类修饰酶aac(6’)-Ib阳性率达29.2％（35/120），但通过测序并未证实新氨基糖苷类修饰酶aac(6’)-Ib-Cr的存在，未检测出质粒上的qnrA、B、S及外排泵qepA基因产物；耐药株中的gyrA基因存在83位氨基酸密码子突变，敏感株中则不存在该突变，并在耐药株中发现gyrA和parC基因针对Genbank号分别为DQ270238和EU977576的菌株存在新的点突变。
　　 结论：合肥地区鲍曼不动杆菌，特别是多重耐药株对氟喹诺酮类药物耐药情况严重，均有较高的耐药率。鲍曼不动杆菌的耐药与gyrA和parC基因点突变有关，质粒上尚未出现新氨基糖苷类修饰酶aac(6’)-Ib-Cr亚型，也没有质粒上的qnrA、B、S和外排泵qepA基因的因素。监测细菌的耐药性对选用抗菌药物,防止抗生素滥用及新耐药菌株的产生非常重要。