反义寡核苷酸药物癌泰得在猕猴体内的药代动力学研究

摘要

癌泰得（Cantide）为第一代反义寡核苷酸药物，结构为全硫代寡聚脱氧核糖核苷酸，包含20个碱基序列。它以端粒酶催化亚基hTERT mRNA 为靶点，根据碱基互补原理杂交后的杂合物阻断了RNA 模板，封闭了hTERT的表达，从而抑制了端粒酶的活性，导致肿瘤细胞凋亡，具有抗肿瘤作用。
　　 本研究是Cantide 临床前研究的一部分，考察了Cantide 在猕猴体内的药代动力学特性，以便为今后的临床试验提供参考。研究比较了猕猴单次vd 不同剂量（8，16，24 mg·kg-1）Cantide 后血浆中原形药物浓度-时间变化和药代动力学性质；并研究了每天vd 8 mg·kg-1 Cantide 1 次，连续7 天后血浆中原形药物浓度-时间变化和药代动力学性质。并同时对单次及多次给药后血浆中Cantide 代谢产物（n-1）和（n-2）的药物浓度-时间变化和药代动力学性质进行了初步观察和比较。
　　 1.猕猴血浆中Cantide 定量分析方法的优化和确证
　　 采用两步固相萃取（SPE）法并结合非胶筛分毛细管电泳（NGCE）技术建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸药物Cantide的定量分析方法。通过对方法进行考察和优化，并最终确定了固相萃取的相关条件（阴离子交换柱上样缓冲液pH值为9.0，上样体积及洗脱体积分别为5mL和3 mL）和NGCE的分析条件（灌胶时间为30min，分离电压为24 kV）。在此条件下，猕猴血浆中Cantide 在1.95～250 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，最低定量限（LLOQ）为1.95μg·mL-1，标准曲线和QC样品中最低浓度点和其余各浓度点的偏差均<15％。批内准确度为93.38％～100.71％，批内相对标准偏差（intra-day RSD）<10.66％；批间准确度为89.46％～103.46％，批间相对标准偏差（inter-day RSD）<8.60％。在不同条件下（室温4 h，4℃存放24 h，反复冻融2 次，-80 ℃保存1个月和-80 ℃保存7个月）Cantide 在猕猴血浆中稳定性良好。
　　 方法学确证结果表明，该方法的特异性、灵敏度、精密度、准确度和稳定性均符合药代动力学研究要求，可以用于Cantide 在猕猴体内的药代动力学研究中。
　　 2.猕猴单次vd 不同剂量Cantide 后原形及其代谢产物（n-1）和（n-2）的血浆药物浓度和药代动力学参数
　　 猕猴单次vd 8、16和24 mg·kg-1 Cantide 后血浆原形药物浓度达峰时间（Tmax）多在滴注结束的即时，分别为32.50±2.89，32.50±2.89，28.75±6.29 min。低、中、高剂量组峰浓度（Cmax）分别为72.21±8.68（与中剂量组相比P<0.001），110.90±11.22（与高剂量组相比P<0.05）和150.01±17.84 μg·mL-1（与低剂量组相比P<0.01），不同给药剂量组间有统计学意义的差别。
　　 末端消除相半衰期t1/2 分别为57.91±23.64 （与中剂量组相比无统计学意义的差别），73.58±25.45（与高剂量组相比无统计学意义的差别）和77.94±8.84 min（与低剂量组相比无统计学意义的差别）。低、中、高剂量组AUC(0-t)分别为4874.46±844.08（与中剂量组相比P<0.05），6998.54±1094.18（与高剂量组相比P<0.05），11057.38±2068.03 μg·min·mL-1（与低剂量组相比P<0.01）。低、中、高剂量组AUC(0-inf)分别为5148.73±1018.81（与中剂量组相比P<0.05），7392.22±1019.76（与高剂量组相比P=0.0571），12462.22±3485.74 μg·min·mL-1（与低剂量组相比P<0.05）。各剂量组给药剂量之比为1：2：3，AUC(0-inf)的增长比为1：1.43：2.42。
　　 低、中、高剂量组血浆清除率CLs 分别为1.60±0.31（与中剂量组相比P<0.05），2.19±0.27（与高剂量组相比无统计学意义的差别），2.04±0.53 mL·min-1·kg-1（与低剂量组相比无统计学意义的差别）。
　　 各剂量组给药后代谢产物（n-1）和（n-2）的血浆药物浓度和药代动力学参数组间比较结果和原形药物类似，同一时间点样品中代谢产物的浓度均低于原形药物，血浆中代谢产物紧随原形药物之后达到峰浓度，短链代谢产物的清除率高于长链的原形药物，猕猴体内的原形药物不断转化成代谢产物，链缩短的代谢产物的MRT 较原形药物延长，末端消除相半衰期增大，高剂量组表现尤为明显。
　　 3.猕猴多次vd 8 mg·kg-1 Cantide 后原形及其代谢产物（n-1）和（n-2）的血浆药物浓度和药代动力学参数
　　 猕猴多次vd 8 mg·kg-1 Cantide 后末次给药血浆原形药物浓度达峰时间（Tmax）为35.00±7.07 min；峰浓度Cmax 为58.34±17.39 μg·mL-1；末端相半衰期t1/2 为57.45±24.38 min，血浆清除率CLs 为1.85±0.14 mL·min-1·kg-1；AUC(0-t)为4010.71±223.81 min·μg·mL-1，AUC(0-inf)为4335.55±306.16 μg·min·mL-1，以上参数与首次给药组相比均无统计学意义差别。首末次给药后其代谢产物（n-1）和（n-2）的血浆药物浓度和药代动力学参数均没有统计学意义的差别，提示多次给药后Cantide 在猕猴体内的代谢过程没有明显改变，药物的代谢和清除过程一致，没有药物蓄积或诱导代谢现象。结果表明，多次vd Cantide 后末次给药组与首次给药组各药代参数近似，无统计学意义的差别。