BNIP3在人髓母细胞瘤中的表达及其与预后的关系

摘要

目的：BNIP3是从人胎肝文库中克隆的具有抑瘤活性的基因，文献报道在人体多种肿瘤组织中有异常表达。近年来，BNIP3与肿瘤的相关性研究已经成为肿瘤基础性研究方面一个新的热点，但其在人髓母细胞瘤方面的研究国内外尚未见文献报道。本研究将通过免疫组织化学方法检测BNIP3在髓母细胞瘤中的表达情况，并探讨其与髓母细胞瘤患者预后的关系。
　　 方法：⑴选取2001年1月至2008年1月安徽医科大学神经外科手术切除存档的髓母细胞瘤标本30例（已排除手术死亡病例），脑外伤减压手术时切除的正常小脑组织标本10例。30例髓母细胞瘤病例中，男22例，女8例，男女比例2.75：1，年龄3-34岁，平均年龄13.4岁。所有病例术后均接受全头颅及椎管放疗，部分病例接受化疗。⑵通过门诊、信件、电话等方式对本组全部30例患者进行随访。生存期从确立诊断之日起计算，终止日期为死亡日期或末次随访日，所有病例随访最后截止日期为2009年1月。⑶采用免疫组织化学S-P法。HIF-1α多克隆抗体和BNIP3单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，SP免疫组织化学试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉金桥生物科技有限公司。BNIP3和HIF-1α工作液浓度均为1：100，具体操作按说明书染色步骤进行，微波修复抗原，以PBS代替一抗作阴性对照。⑷以细胞质和（或）细胞核中出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数，取均值，计算平均着色百分比，≥10％为阳性表达，＜10％为阴性表达。⑸采用 SPSS 13.0统计软件进行数据处理，分别采用卡方检验、Fisher精确检验、Spearman相关分析、Kaplan-Meier生存分析、Cox比例风险回归模型等统计学方法进行统计分析。先进行单因素COX回归分析，把P小于0.20的因素作为有统计学意义的变量，最后把单因素有意义的变量放入多因素模型，方法采用逐步回归的分析进行多元COX回归分析。
　　 结果：①30例髓母细胞瘤标本中，19例BNIP3表达阳性，阳性表达率63.3％，BNIP3主要表达于细胞核，部分细胞质中也有表达，为棕褐色反应产物，阳性表达以肿瘤坏死区域周围更为显著；17例HIF-1α表达阳性，阳性表达率为56.7％，HIF-1α在细胞核和细胞质中均有表达，为棕褐色反应产物；两者在正常小脑组织中均无表达。BNIP3和HIF-1α在髓母细胞瘤和正常小脑组织表达差异有显著意义（P＜0.01）；同时，两者在髓母细胞瘤组织中的表达呈正相关（r=0.451，P=0.012）。②Kaplan-Meier生存分析提示BNIP3表达阳性组的累计生存情况较阴性组差，对数秩检验（Log-rank test），X2=12.60，P=0.000。③按照Cox比例风险模型各因素量比，以性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、伴发脑积水情况、脑干侵袭程度、肿瘤切除率、BNIP3为变量，进行单因素COX回归分析，把P＜0.20的因素作为有统计学意义的变量，最后把单因素有意义的变量(年龄、肿瘤切除率、BNIP3)放入多因素模型，采用逐步回归的分析方法进行多元COX回归分析。结果表明，影响髓母细胞瘤预后独立的因素为BNIP3(P＜0.01)，其比值比（OR）为5.350，OR值大于1，提示BNIP3是一个独立危险因素。
　　 结论：⑴BNIP3高表达在髓母细胞瘤的发生、发展中可能具有重要作用；⑵BNIP3的表达情况可以作为判断髓母细胞瘤预后的一项指标；⑶BNIP3有望成为髓母细胞瘤基因治疗中的一个新的分子靶标。