孕早期HCMV感染对子代大鼠海马钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

摘要

目的：探讨HCMV先天性感染对子代大鼠海马钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响,为进一步研究HCMV先天性感染对子代大鼠海马学习记忆损伤的机制及防治HCMV先天性感染导致的学习记忆障碍等神经残疾后遗症提供科学的实验依据。
　　方法：将SPF级SD见栓孕大鼠随机分为实验组与对照组,每组各10只。用HCMV致细胞病变效应(CPE)达+++~++++的病毒悬液接种第5代HELF细胞,待细胞变性95％以上,于妊娠第4天分别在实验组孕鼠腹腔内注射HCMV悬液0.5 mL和对照组孕鼠腹腔内注射等量的人胚成纤维细胞上清液。子代大鼠30~60天时制备海马神经细胞并荧光测定其游离钙离子浓度([Ca2+]i)。取子代大鼠脑组织进行海马的病理学观察,及海马CaMKⅡ的免疫组化和蛋白印迹实验。最后进行统计学比较研究。
　　结果：与对照组比较,光镜下实验组子代大鼠脑组织海马细胞带细胞数有所减少,组织结构稀疏,细胞排列紊乱,神经元退变消失;荧光测定结果显示孕早期HCMV感染实验组子代大鼠海马神经细胞[Ca2+]浓度(153.47±37.26nmol/L)明显高于对照组(102.32±21.33nmol/L),差异有统计学意义(P＜0.01);光镜下免疫组化反应阳性产物呈棕褐色,主要位于锥体细胞胞质。实验组子代大鼠CaMKⅡ免疫阳性细胞平均光密度值(0.2139±0.1125)显著低于对照组(0.2511±0.1097),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组子代大鼠CaMKⅡ免疫印迹平均光密度值(0.4452±0.1351)显著低于对照组(1.2558±0.1142),差异有统计学意义(P＜0.01)。
　　结论：孕早期HCMV感染的子代大鼠海马神经细胞游离钙离子浓度较对照组升高;孕早期HCMV感染能够使子代大鼠海马神经细胞膜蛋白中CaMKⅡ的表达降低。上述两种结果可能与HCMV先天性感染损伤海马学习记忆功能有关。

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缩略词表

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1.引言

2. 材料和方法

2.1 病毒株和细胞株

2.2 主要试剂

2.2 实验动物

2.3 主要实验仪器

2.4 方法

2.4.1 HELF细胞的培养

2.4.2 HCMV AD169株的增殖

2.4.4 孕早期HCMV先天性感染SD大鼠模型的建立

2.4.5 子代大鼠海马神经细胞制备及游离钙离子浓度( [ Ca2+] i) 的荧光测定

2.4.6 子代大鼠脑组织HE染色

2.4.7 免疫组化

2.4.8 蛋白印迹

2.4.8 统计学处理

3. 结果

3.1 接种HCMV后孕鼠的行为表现

3.2 子代大鼠海马组织病理学（HE染色）

3.3 子代大鼠海马神经细胞游离钙离子浓度

3.4 子代大鼠海马免疫组化结果

3.5 子代大鼠海马膜蛋白CaMKⅡ免疫印迹分析

4. 讨论

5. 结论

参考文献

附录

致谢

人巨细胞病毒先天性感染损伤海马突触可塑性的机制