Galectin-3促进骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞增殖和血管生成的研究

摘要

目的:研究Galectin-3(Gal-3)对骨髓间充质干细胞(MSCs)来源的内皮细胞增殖和血管生成的影响,旨在为下肢缺血性疾病的治疗和组织工程血管的构建提供一个潜在的方法和选择,为骨髓MSCs在血管外科的基础研究及可能的临床应用提供实验基础。
　　方法:密度梯度离心法分离纯化SD大鼠骨髓MSCs,取第三代,加入10ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)和2ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),体外联合诱导14d,进行免疫组织荧光染色和电镜鉴定,观察Ⅷ因子相关抗原(von Willebrand factor,vWF)的表达情况及细胞分化后细胞浆W-P小体的超微结构。然后用低、中、高不同浓度Gal-3(0.1μg/mL,1.0μg/mL和5.0μg/mL)对骨髓MSCs来源的内皮细胞分别作用24h。
　　1.采用MTT比色法观察不同浓度Gal-3对骨髓MSCs来源的内皮细胞增殖的影响;
　　2.利用流式细胞仪检测不同浓度Gal-3对骨髓MSCs来源的内皮细胞DNA细胞周期的变化;
　　3.利用小管形成实验在matrigel培养基上观察不同浓度Gal-3对骨髓MSCs来源的内皮细胞血管生成的影响。
　　结果:1.中、高浓度Gal-3组吸光度(OD)分别为0.3002±0.0159和0.3514±0.0133,较对照组OD值(0.2339±0.0041)明显增加,具有统计学意义(P<0.05);
　　2.流式细胞术DNA细胞周期显示低、中、高浓度Gal-3组S期细胞比例(％)分别为:29.42±0.45,34.56±0.82和52.58±2.84,较对照(20.40±1.81)显著增加(P<0.05),中、高浓度Gal-3组G2M期细胞分别为:4.88±1.12和5.26±0.45,较对照组(1.90±1.74)比例增加(P<0.05);细胞增殖指数(PI)分别为32.45±0.94、39.44±0.75和57.84±2.52,与对照组(22.30±3.12)相比差异有显著性(P<0.05);
　　3.小管形成实验结果显示不同浓度Gal-3组的相对小管生成总长度相比较对照组有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:1.Gal-3可以促进骨髓MSCs来源的内皮细胞增殖;
　　2.Gal-3可以促进骨髓MSCs来源的内皮细胞血管生成。

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Galectin-3促进骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞增殖和血管生成的研究

1. 前言

2. 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 动物

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要设备

2.2 方 法

2.2.1 主要试剂的配制

2.2.2 MSCs的分离及原代培养

2.2.3 MSCs的传代培养

2.2.4 MSCs的诱导分化培养

2.2.5 骨髓MSCs定向诱导分化为血管内皮细胞及鉴定

2.2.6 四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞增殖

2.2.7 流式细胞仪检测细胞周期

2.2.8 体外血管生成实验（Tube formation assay）

2.2.9 统计学处理

3 结果

3.1 生长情况、细胞形态特征和鉴定

3.1.1 骨髓MSCs形态学特点及生长特性

3.1.2 诱导后细胞免疫荧光染色及电镜观察结果

3.2 不同浓度Gal-3作用24h内皮细胞OD值

3.3 不同浓度Gal-3作用24h内皮细胞细胞周期变化

3.4 体外血管生成实验（Tube formation assay）

4. 讨论

4.1 骨髓MSCs分离培养及血管内皮细胞特性

4.2 MSCs定向分化为血管内皮细胞及鉴定

4.3 Galectin-3促进MSCs来源的内皮细胞增殖及血管生成

5. 结论及展望

参考文献

附录

致谢

综述