三叉神经电刺激预处理对大鼠急性癫痫发作的影响及其机制的初步探索

摘要

目的：
　　1.通过行为学改变观察经皮三叉神经电刺激(TCTNS)预处理后对戊四氮(PTZ)诱导的大鼠急性癫痫发作的影响。
　　2.通过检测TCTNS预处理后对海马部位谷氨酸脱羧酶(GAD)表达的影响,探讨三叉神经电刺激抗癫痫可能的机制。
　　3.通过检测TCTNS对大鼠孤束核、蓝斑核、丘脑、大脑皮层和海马等结构神经元内Fos蛋白表达(反应神经元的兴奋性)的影响,探讨三叉神经电刺激兴奋传导的可能机制。
　　资料和方法：
　　1.选用成年健康雄性SD大鼠48只,分对照组(假刺激组)和实验组(电刺激组),分别给予连续1d、7d、14d、28d的假刺激和三叉神经电刺激预处理后腹腔注射PTZ,观察给药后2h内大鼠急性癫痫发作行为学表现,行为学观察2h后立即水合氯醛麻醉处死,多聚甲醛灌注固定等,并应用免疫组织化学方法检测大鼠海马各区GAD65和GAD67的表达。实验组间比较采用配对t检验,实验组内比较采用双因素方差分析;P<0.05定义为差异有统计学意义。
　　2.选用成年健康雄性SD大鼠42只,分对照组(假刺激组)、三叉神经电刺激后存活0h、1h、2h、3h、4h、6h后取脑共7组。刺激组刺激参数:频率140Hz、电流10mA、脉宽0.5ms、正相脉冲刺激30s间歇5min,连续刺激2h。对照组刺激参数均设置为0。应用免疫组化方法检测电刺激对正常大鼠孤束核、蓝斑、丘脑、大脑皮层和海马等结构神经元内fos蛋白表达和分布,探讨三叉神经电刺激对正常大鼠脑同步化影响的可能机制。组间比较采用配对t检验,P<0.05定义为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1在三叉神经预刺激实验中:
　　1.1两组大鼠预刺激后急性发作行为学改变:刺激1d、7d实验组与其相应假刺激组比较大鼠发作程度上无明显差异(P﹥0.05)。而连续刺激14d、28d刺激组大鼠癫痫发作程度上较其相应对照组明显减轻,差异有统计学意义(P﹤0.05),癫痫发作级别较低,持续时间短,无死亡;假刺激组发作程度均较重,持续时间长,分值均较高。在实验中,1d实验组和28d假刺激组大鼠分别死亡2只,7d假刺激组死亡1只。
　　1.2海马各部位均有GAD65阳性细胞表达,但以CA3区和背侧齿状回表达最密集,主要在胞浆中表达。与相应假刺激组比较,刺激1d组大鼠海马区GAD65阳性表达增加不明显(P﹥0.05),刺激组7d、14d、28d大鼠海马区GAD65表达数目明显增加(P﹤0.05),着色增强,并且随刺激时间延长,GAD65阳性表达增加越明显,各时间段实验组间比较均有差异(P﹤0.05)。
　　1.3GAD67在海马CA2、CA3及DG区表达较密集,也主要在胞浆中表达,与相应假刺激组比较,电刺激各组GAD67阳性细胞光密度比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05),但表达增加与刺激时间长短无明显关系。
　　2在三叉神经刺激正常大鼠后检测脑内c-Fos蛋白表达的实验中:和假刺激组相比,电刺激各组c-Fos表达明显增加。在接受电刺激后存活0h组内即可观察到c-Fos蛋白表达,1小时后表达明显增加,2-3小时达到高峰,4小时开始下降,6小时基本完全消失。表达呈弥漫性,但以皮层、海马、丘脑、下丘脑、孤束核和蓝斑核最明显,不同部位的变化趋势一致。
　　结论：
　　1.经皮三叉神经电刺激预处理可以减轻PTZ诱导的大鼠急性癫痫发作,这可能与海马区内GAD65和GAD67阳性表达增多,进而诱导脑内抑制性机制的增强有关。
　　2.经皮三叉神经电刺激可以激活正常大鼠孤束核、蓝斑、丘脑、下丘脑、海马、大脑皮层等部位,本研究为进一步进行三叉神经电刺激治疗癫痫的机制提供实验依据。

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引言

第一部分 经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮致痫大鼠行为学改变及海马GAD表达的影响

1 材料与方法

1.1实验动物

1.2 试剂及仪器

1.3 分组及癫痫模型建立

1.4 取材及切片

1.5 免疫组织化学染色

1.6 摄像和分析

1.7 统计学处理

2 结果

3 讨论

第二部分 经皮三叉神经电刺激对正常大鼠脑内fos蛋白表达和分布的影响

1 材料和方法

1.1 实验动物及分组

1.2 动物模型制备

1.3 取材及切片

1.4免疫组织化学反应

1.5 c-Fos阳性细胞数测定

1.6 统计学方法

2 结果

3 讨论

结论

展望

参考文献

附录

致谢

综述