骨髓增生异常综合征造血细胞凋亡特征及药物诱导的恶性克隆细胞系生物学变化

摘要

目的：探讨骨髓增生异常综合征(MDS)造血细胞凋亡特征及相关药物对MDS-L原始细胞系的调控作用。 方法：1，用免疫组织化学方法(碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶系统，APAAP)结合DNA末端原位标记(ISEL)同步检测30例MDS病人骨髓切片标本中CD68+或CD41阳性细胞及凋亡细胞，并分析二者间关系，缺铁性贫血病例做对照。2，结合ISEL/流式细胞仪(FCM)和荧光原位杂交(FISH)共检测19例MDS病例凋亡信号和克隆标记，以判断凋亡细胞的克隆性来源；3，不同浓度不同时间的三氧化二砷(As2O3)和/或肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)作用于MDS髓系原始细胞系MDS-L，然后用流式细胞仪AnnexinV荧光标记检测细胞凋亡。半固体培养18天后收获细胞行形态学分类和分化抗原检测。甲基化特异性PCR(Msp)检测抑癌基因P15ink4b甲基化程度、RT-PCR检测P15ink4bA水平表达，免疫标记检测P15ink4b蛋白水平表达。结果：1，MDS病例骨髓中有核细胞凋亡明显多于对照组；MDS之巨核细胞和微小巨核细胞(CD41阳性细胞)较对照组明显增高，P分别为＜0.05和＜0.01。并呈现异常分布及成簇现象。巨核系凋亡无明显增加。巨核系凋亡仅见于微小巨核细胞；MDS骨髓CD68阳性细胞数与造血细胞凋亡显示显著正相关；r=0.83，P＜0.001.MDS低危组(RA+RAS)CD68阳性细胞(巨噬细胞)和ISEL阳性细胞(凋亡细胞)数均高于高危组(RAEB+RAEB-t)(p分别＜0.05和＜0.01)。2，10例经ISEL/FISH分析的MDS患者骨髓有核细胞中异常克隆细胞百分比平均为37.1﹪，凋亡细胞中异常克隆细胞百分比仅为24.0﹪。9例经FCM/FISH分析者，8例显示凋亡细胞中核型正常百分比高于非凋亡细胞中核型正常百分比。3，不同As2O3/TRAIL组合均可诱导细胞发生凋亡，48h药物处理时达高峰(约25﹪)，72h时仍有约9﹪的细胞凋亡。药物处理(尤其是As2O3+TRAIL)导致细胞明显的形态学分化，而TRAIL能显著降低CD34+细胞比率。未经处理的MDS-L细胞基本不表达P1ink4b并伴有明显的P15ink4bDNA甲基化。药物处理后P15ink4b表达增强，并伴有DNA去甲基化；但免疫标记未显示蛋白水平P15ink4b表达的变化；结论：1,MDS存在造血细胞过度凋亡；外周血小板减少的原因可能与病态巨核细胞产生和释放血小板障碍有关；MDS巨噬细胞与造血细胞凋亡的相关性提示肿瘤坏死因子(TNFα)参与凋亡诱导过程。2，MDS凋亡细胞主要来源于残余正常造血细胞，克隆细胞存在凋亡抵抗倾向。3，As2O3和(或)TRAIL处理能促进MDS恶性细胞凋亡，诱导细胞分化；并能通过DNA去甲基化而增强原本几乎消失的抑癌基因P15ink4b表达，有进一步进行基础研究的价值和临床应用前景。

目录

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摘要

主要符号和缩略语说明

第一章 绪论

第二章 MDS凋亡相关发病机制及相关治疗的综述

第三章 MDS巨核系造血和凋亡特征及巨噬细胞与凋亡的相关性

第四章 骨髓增生异常综合征造血细胞凋亡的克隆性研究

第五章 As2O3/TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征原始细胞系MDS-L的生物学变化

第六章 总结与展望

附录（一）有关造血细胞凋亡特征相关研究的图片

附录（二）有关造血细胞凋亡克隆性来源相关研究的图片

附录（二）有关As2O3/TRAIL诱导MDS-L细胞系生物学变化研究图片

致谢

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