南五味子质量标准与鱼腥草中黄酮类成分的含量测定研究

摘要

南五味子为华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实，曾与同属五味子S.chinensis(Turcz.)Baill.的果实共同作为药材五味子使用，但两者在化学成分的种类和含量上都存在显著差异。《中国药典》自2000年版起，将南五味子与五味子分别收载。2005版《中国药典》一部收录南五味子药材的质量标准中已包括性状、TLC鉴别、HPLC含量测定和杂质检查等项，尚缺少粉末显微鉴别和水分、灰分检查指标；其中TLC鉴别方法与五味子完全相同，均采用五味子甲素(deoxyschizandrin)作为对照品，缺少专属性和特征性；含量测定中，HPLC色谱条件需要优化，且五味子酯甲的含量限度需要按干燥品重新计算修订；另外，炮制项下对醋南五味子仅规定了炮制工艺和性状鉴别特征。本文对10批南五昧子药材样品及其醋制品进行了性状、粉末显微与TLC鉴别、水分与总灰分检查，以及含量测定研究，完善了南五味子的药典标准，为南五味子的有效鉴别和质量控制提供了科学依据。　　同时以安五脂素和对照药材为对照建立了新的TLC鉴别方法，以三氯甲烷-丙酮(60:1)为展开剂，磷钼酸试液为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰。结果发现，10批南五味子的供试品及南五味子对照药材色谱中在与安五脂素相应的位置，显相同颜色的斑点，五味子对照药材色谱中未见安五脂素斑点，表明方法专属性较强。　　依据《中国药典》2005版相关规定测定了10批南五味子药材的水分和总灰分，根据测定结果提出南五味子水分和总灰分限度分别为不得过12.0％和6.0％。　　优化了《中国药典》(2005年版一部)南五味子HPLC含量测定的色谱条件，调整流动相比例为四氢呋喃-水(38:62)，并按干燥品重新计算修订了五味子酯甲的含量限度。实验结果显示，五味子酯甲在0.0116 mg/ml-0.5800 mg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均加样回收率为101.7％，RSD=2.18％(n=6)。结果显示，10批南五味子药材中五味子酯甲的含量为0.25％～0.74％，以干燥品计含量为0.28％～0.80％，按干燥品计算，南五味子药材中五味子酯甲的含量不得少于0.20％。　　采用药典方法制备了10批醋南五味子样品，对其进行了性状、粉末显微和TLC鉴别、水分检查和含量测定研究。结果表明，10批醋南五味子样品性状完全符合现行药典规定特征；醋南五味子与南五味子的粉末显微特征无明显区别；前述新建立的南五味子TLC鉴别方法对醋南五味子同样适用，且两者薄层色谱无明显区别；根据水分测定结果提出醋南五味子水分限度为不得过12.0％；采用与南五味子相同的HPLC色谱条件测定醋南五味子中的五味子酯甲含量，以干燥品计算并制定含量限度为不得少于0，20％。　　鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋的功效，是国家卫生部正式确定为“药食两用”的品种之一。　　本课题组研究表明，抗补体活性是清热解毒中药发挥清热药效的作用机理之一，姜韵、张婷分别对鱼腥草药材及含有鱼腥草的复方[1]进行了抗补体活性成分研究，发现鱼腥草中槲皮苷、异槲皮苷等多种黄酮类成分均具有不同程度的抗补体活性，文献报道这些黄酮类成分同时具有抗病毒、抗炎、抗过敏等活性[2-3]，因此可作为鱼腥草质量控制的指标成分。本文收集了11批不同产地的鱼腥草药材，测定了其总黄酮的含量，利用LC-MS/MS方法对鱼腥草50％甲醇提取液的化学成分进行定性分析，并采用HPLC方法测定了芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和，槲皮苷4种主要活性黄酮的含量。结果显示，不同产地鱼腥草中黄酮类成分含量差异较大，总黄酮含量在12.897～70.352 mg/g之间；以干燥品计算，鱼腥草鲜品中黄酮类成分的含量高于干品；且鲜品不同部位中，叶的黄酮类含量最高，茎次之，根及根茎中黄酮类含量最低，且只检测到微量的金丝桃苷，其他三种黄酮苷成分未检测到。研究为鱼腥草的质量控制和合理应用提供了依据。