盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠早期肠道损伤与神经肽变化及其相关性研究

摘要

目的:本实验采用大鼠盲肠结扎穿孔脓毒症模型,动态观察脓毒症大鼠早期肠道损伤情况及血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)变化情况,初步探讨脓毒症大鼠肠道损伤的机理及其发病机制。
　　方法:SD大鼠66只,雌雄不拘,随机分为3组:(1)正常对照组(A组,n=6),假手术组(B组,n=30),脓毒症组(C组,n=30);(2)A组动物于称重后,麻醉,经腹主动脉采血,采用酶联免疫分析法检测二胺氧化酶(DAO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)水平,采取少许回肠末端行病理切片观察肠道粘膜损伤情况。(3)B组动物麻醉后行盲肠探查术后关闭腹腔,分别于术后3h,6h,12h,24h和48h五时相点行与正常对照组相同的操作步骤,在每一时相点取少许回肠末端行病理切片观察肠道粘膜损伤情况。每时相点6只大鼠;(4)C组动物行盲肠结扎穿孔(CLP)术后3h,6h,12h,24h和48h五时相点行与正常对照组相同的操作步骤,在每一时相点取少许回肠末端行病理切片观察肠道粘膜损伤情况。每时相点6只大鼠。(5)所有数据以“均数±标准差”表示,采用SPSS13.0统计软件包进行分析,相关性分析采用Spearman等级相关分析。
　　结果:
　　1.脓毒症组在CLP术后3h血清DAO水平即升高,与正常对照组和假手术组相比差异有统计学意义(p<0.05),且逐步升高,于48h时达到最高值(1.47±0.02pg/ml),高于正常对照组和假手术组(p<0.05)。正常对照组与假手术组比较,各时相点差异无统计学意义(p>0.05)。
　　2.脓毒症组大鼠血清TNF-α水平在 CLP术后即明显高于正常对照组与假手术组(p<0.01),在24h达峰值(390.94±27.70pg/ml),随后有下降趋势,但仍显著高于正常对照组和假手术组(p<0.01);CLP术后3h血清IL-1平开始升高(221.40±8.06pg/ml),显著高于正常对照组与假手术组(p<0.05),在6h达峰值(253.21±4.54pg/ml),随后有下降趋势,但仍高于正常对照组和假手术组(p<0.05)。正常对照组与假手术组比较,各时相点差异无统计学意义(p>0.05)。3.脓毒症组大鼠血清CGRP水平在CLP术后3h水平明显降低(80.87±4.65pg/ml),与正常对照组和假手术组相比差异有统计学意义(p<0.05),之后逐步上升,但在48h仍低于正常组(171.36±6.12pg/ml);血清NPY水平在CLP术后3h即明显上升(548.25±8.49pg/ml),与正常对照组和假手术组相比差异有统计学意义(p<0.05),之后逐渐下降,在48h仍高于正常组(313.00±10.63pg/ml)。
　　4.病理切片结果显示正常对照组大鼠肠道粘膜各层结构完整,肠绒毛排列整齐。假手术组肠道病理形态与正常组类似。CLP后肠绒毛出现排列混乱、缩短或变钝。后期上皮细胞变性坏死脱落显著,粘膜下层间质水肿。
　　5.TNF-α、IL-1、CGRP、NPY与DAO之间的相关性。
　　1)TNF-α与DAO具有显著正相关,相关系数为0.897,P<0.01;IL-1与DAO具有显著正相关,相关系数为0.679,P<0.01。
　　2)CGRP与DAO具有显著正相关,相关系数为0.904,P<0.01;NPY与DAO具有显著负相关,相关系数为-0.974,P<0.01。
　　3)TNF-α与CGRP具有显著正相关,相关系数为0.756,P<0.01,TNF-α与NPY具有显著负相关,相关系数为-0.860,P<0.01;IL-1与CGRP具有显著负相关,相关系数为-0.859,P<0.01,IL-1与NPY具有显著正相关,相关系数为0.742,P<0.01。
　　结论:
　　1.在脓毒症大鼠发病过程中,血清DAO的水平随着病程的发展而升高。脓毒症大鼠存在胃肠道粘膜损害,且在伤后不断加重。
　　2.在胃肠道损伤的过程中,脓毒症大鼠血清中TNF-α及IL-1等炎症因子异常升高,可能参与了其所致的肠粘膜损伤。
　　3.脓毒症发病时,脓毒症大鼠血清中CGRP异常下降,NPY异常上升,导致胃肠道的血液循环障碍,可能是其所致胃肠粘膜的原因之一。
　　4.脓毒症所致胃肠道粘膜损伤时,大鼠血清中CGRP、NPY的异常变化可能与炎症因子大量释放有关。

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1、引言

2、材料与方法

2.1 主要试剂

2.2 主要仪器

2.3 实验动物模型与分组

2.4 标本采集与处理

2.5 标本测定与方法

2.6 统计学处理

3、结果

3.1 二胺氧化酶的检测结果

3.2血清TNF-α的检测结果

3.3 IL-1检测结果

3.4 降钙素基因相关肽（CGRP）的检测结果

3.5神经肽Y（NPY）的检测结果

3.6 胃肠道病理切片观察结果（照片见附录）

3.7 统计结果

4 讨论

5 结论

参考文献

附 录

综述