流式细胞术检测CyclinD1和BCL-2在B细胞淋巴瘤诊断中的意义

摘要

目的:探索流式细胞术检测Cyclin D1和BCL-2在B细胞淋巴瘤诊断中的方法、可行性及临床意义。
　　方法:1)收集血液内科收治确诊的血液病患者45例,其中男22例,女23例,年龄8-84岁,其中HL3例,CLL15例,DLBCL11例,MCL3例,MZL2例,FL2例,NK-T细胞淋巴瘤4例,T细胞淋巴瘤5例,收治后详细记录治疗经过,并进行后期随访和疗效评定。根据2008年WHO淋巴瘤分类标准,将淋巴瘤患者分类。根据张之南《血液病诊断与疗效指南》疗效判定,将接受治疗的患者分为完全缓解(CR),不确定的完全缓解(CRu),部分缓解(PR),疾病稳定(SD),复发(适用于取得CR/Cru者)和疾病进展(PD)。2)按照年龄、性别相匹配的原则,选取在医院接受常规体检且各项检验指标均在正常范围内的健康体检者25名作为健康对照组。3)选取病理科已确诊的Cyclin D1或BCL-2阳性病例组为阳性对照组(8例),病理已确诊的Cyclin D1或BCL-2阴性的病例组为阴性对照组(7例)。采用四色直接免疫荧光素法标记细胞抗原,包括细胞膜表面和胞核抗原,如:CD5、CD19、CD20、CD23、CD10、 Cyclin D1、BCL-2等,以CD19+细胞设门,多参数流式细胞术检测各亚型淋巴瘤患者外周血、骨髓或淋巴结Cyclin D1及BCL-2表达水平。所有数据用SPSS13.0统计软件处理分析;各计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,两组数值符合正态分布及方差齐性采用t检验,否则采用非参数检验;多组之间的比较,数值符合正态分布和方差齐性采用方差分析,否则采用非参数检验,P<0.05为差异具有统计学意义。比较两种检测方法的差异采用配对卡方检验,P<0.05为差异具有统计学意义。
　　结果:
　　1)本课题对25例正常成人志愿者Cyclin D1MFI及BCL-2 MFI进行了分析后得出x±s值及95％可信区间,从而得出流式检测正常参考值范围,并由此得出判断Cyclin D1的阳性阈值为Cyclin D1MFI>0.5;同样,判断BCL-2的阳性阈值为BCL-2 MFI>2.7。2)根据FCM确定的Cyclin D1及BCL-2阴阳性诊断标准,单纯与病理免疫组化结果进行对比发现,FCM检测MCL患者的Cyclin D1灵敏度及特异性为100%,检测FL患者的BCL-2灵敏度及特异性也为100%,且FCM检测Cyclin D1及BCL-2结合免疫表型等对病理不能分类淋巴瘤明确了亚型5例。3)比较健康对照组与全体B细胞淋巴瘤患者组外周血Cyclin D1和BCL-2 MFI显示:B细胞淋巴瘤患者Cyclin D1(1.824±0.312)和BCL-2(4.259±0.541)的表达水平较正常对照组(分别为0.356±0.159,1.938±0.324)明显升高,两者均具有统计学显著性差异(p<0.0001),4)不同亚型淋巴瘤患者外周血Cyclin D1 MFI的表达有差异,霍奇金淋巴瘤患者Cyclin D1 MFI(0.386±0.112)明显低于非霍奇金淋巴瘤患者(1.623±1.987)(p<0.001),而在非霍奇金淋巴瘤患者中,套细胞淋巴瘤患者Cyclin D1阳性最高(100%),其余亚型均为阴性;不同亚型淋巴瘤患者外周血BCL-2的表达情况有差异,霍奇金淋巴瘤患者BCL-2(2.045±0.877)明显低于非霍奇金淋巴瘤(4.045±0.499)患者(p<0.001),在非霍奇金淋巴瘤中,T细胞淋巴瘤均为阴性,FL、MCL表达阳性率最高(100%),其次为MZL(50%)、CLL(30%)、DLBCL(45%)。5)在Cyclin D1或BCL-2阳性的淋巴瘤患者中,对治疗后临床判断达部分缓解以上的患者进行流式细胞仪检测,发现Cyclin D1(治疗前3.099±0.349;治疗后1.008±0.279)或BCL-2(治疗前7.814±1.030;治疗后3.131±0.522)的平均荧光强度均有显著降低(p<0.001)。
　　结论:
　　1)流式细胞术检测淋巴细胞中Cyclin D1及BCL-2的表达方法简便可行;2)建立流式细胞术检测淋巴细胞中Cyclin D1及BCL-2的参考值;3)FCM检测Cyclin D1及BCL-2对B细胞淋巴瘤的诊断分型有意义,具有很好的灵敏度和特异性;4)淋巴瘤患者治疗后Cyclin D1或BCL-2表达下调,其表达变化与治疗效果有关,可以作为临床观察治疗效果的指标之一。

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英文摘要

1、引 言

2、材料和方法

2.1研究对象和分组

2.2抗体和试剂试剂名称

2.3 仪器仪器名称

2.4 标本收集

2.5 单个核细胞制备

2.6 细胞膜固定打孔的最佳条件的摸索：

2.8 流式细胞仪检测

3、统计学方法

4. 结果

4．1 检测方法的建立和确认

4.2 临床淋巴瘤患者的Cyclin D1及BCL-2的表达情况

4 讨论：

5结 论

参考文献

附录

致谢

综述