胃病患者血清幽门螺杆菌抗体和肿瘤标志物分析及SARM、MyD88、TRIF的表达

摘要

背景：幽门螺杆菌是一种革兰阴性、螺旋状、微需氧菌,Hp是已被公认的消化性溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤主要致病因素,但胃癌的发生是一个多因素、多步骤、多基因参与的过程。现已阐明固有免疫引导的炎症反应主要由TLR介导,而TLR激活与肿瘤发生发展的关系越来越受到人们的关注。目前,MyD88依赖信号途径激活连接局部炎症与肿瘤发生发展的关系较为清楚,在前列腺癌、上皮细胞癌、乳腺癌等恶性疾病中,都表现出局部炎症、肿瘤的增殖转移与MyD88依赖信号途径的表达水平呈正相关;阻断MyD88的功能使局部炎症和肿瘤增殖转移受到抑制。TRIF和SARM依赖途径的激活与肿瘤的关系还不清楚,该途径在肿瘤细胞中的表达未见文献报道。
　　目的：了解胃癌、消化性溃疡和慢性浅表性胃炎患者中Hp感染率,及安徽地区上消化道疾病患者中Hp的优势亚型,探讨Hp与上消化道疾病之间的关系,并探讨单项及多项肿瘤标志物联合检测对胃癌临床诊断的应用价值。了解TLR信号接头蛋白SARM、MyD88、TRIF在胃癌、胃溃疡和胃炎中的表达情况,阐明胃癌组织中是否有SARM、MyD88、TRIF的表达,为进一步探讨Hp感染与TLR受体通路之间的关系,及其与胃癌发生发展的关系提供实验基础。
　　方法：(1)采用免疫印迹抗体检测法测定患者血清中Hp CagA和VacA抗体。(2)应用全自动化学发光分析系统检测血清CA125、CA153、CA199、CA72-4、CEA、AFP、PGⅠ、PGⅡ和TPA九种肿瘤标志物及TLR表达相关的细胞因子IL-6和IL-8。(3)免疫组化法检测TLR信号接头蛋白SARM、MyD88、TRIF的表达情况。
　　结果：(1)155例患者中,Hp阳性129例,检出率为83.23％;三组中,消化性溃疡组Hp检出率最高,为96.66%,其次是胃癌组,为83.95%,慢性胃炎组的检出率最低为72.98%,慢性浅表性胃炎组和消化性溃疡组 Hp检出率差异有统计学意义(P<0.05)。慢性浅表性胃炎组、消化性溃疡组和胃癌组三组中HpⅠ型检出率分别为67.57%、83.33%、77.27%,HpⅡ型检出率分别为5.41%、13.33%、5.68%, HpⅠ型检出率均明显高于Ⅱ型(P=0.000),但各组间的构成比差异无统计学意义。Ⅰ型抗体的表达中CagA+VacA抗体阳性率显著高于单个抗体阳性率(P=0.000)。(2)九项肿瘤标志物的阳性检出率在胃癌组均明显高于消化性溃疡组和慢性浅表性胃炎组,其中CA199、CA72-4、CEA、PGⅠ和联合检测这五项指标在三组间的差异有统计学意义(P<0.05)。将消化性溃疡组及慢性浅表性胃炎组合并成良性病变组后与恶性肿瘤组即胃癌组比较,发现CA125、CA199、CA72-4、CEA、PGⅠ、PGR及联合检测这七项指标在良恶性病变组之间的差别均有统计学意义。联合检测对胃癌检出的特异性下降为26.32%、但敏感性提高至94.34%。(3)胃癌组、胃溃疡组和慢性浅表性胃炎组患者血清中 IL-6浓度分别为5.44±6.73pg/ml、7.44±17.24pg/ml和3.12±2.63pg/ml;IL-8浓度分别为34.53±41.70pg/ml、21.83±35.85pg/ml和10.80±12.15pg/ml,两种细胞因子在三组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。将消化性溃疡组及慢性浅表性胃炎组合并成良性病变组与恶性肿瘤组即胃癌组后,IL-8在恶性肿瘤组明显高于良性病变组,在两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组的IL-6和IL-8的阳性检出率均高于消化性溃疡组和慢性浅表性胃炎组,但在三组间的差异无统计学意义(P>0.05)。(4)Hp(+)和Hp(-)胃癌组SARM、TRIF和MyD88的积分光密度均明显高于胃溃疡组和慢性浅表性胃炎组,四组间的差异有统计学意义(P<0.05)。Hp(+)和Hp(-)胃癌组中SARM、TRIF和MyD88的积分光密度的差异无统计学意义(P>0.05),胃溃疡组和慢性浅表性胃炎组中SARM、TRIF和MyD88积分光密度的差异亦无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：(1)三种常见的上消化道疾病均伴有较高的 Hp感染率。HpⅠ型为优势亚型,且以CagA+VacA抗体阳性多见。
　　(2)血清肿瘤标志物检测有助于鉴别诊断胃部良性与恶性疾病。联合检测有助于提高消化系恶性肿瘤诊断灵敏度。
　　(3)胃癌、胃溃疡和慢性浅表性胃炎中均有SARM、MyD88和TRIF阳性表达,在胃癌组织中呈现高表达。
　　(4)SARM亚细胞水平主要在胞浆,但有少数呈核表达,MyD88和TRIF定位于胞浆。

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第一部分胃癌、胃溃疡、胃炎患者血清幽门螺杆菌抗体和肿瘤标志物的检测与分析

1 引言

2 材料与方法

2.1 研究对象

2.2 主要试剂、试剂配制及仪器

2.3 研究方法

2.4 结果判定

2.5 统计学分析

3 结果

3.1 胃癌组、胃溃疡组和慢性浅表性胃炎组中Hp检出率及免疫分型

3.2 胃癌组、胃溃疡组和慢性浅表性胃炎组中Ⅰ型抗体的表达情况

3.3 胃癌组、胃溃疡组及慢性浅表性胃炎组九项血清肿瘤标志物的检测结果比较

3.4 胃癌组、胃溃疡组及慢性浅表性胃炎组九项血清肿瘤标志物的的单项检测及联合检测的阳性率比较

3.5 良恶性病变组中九项血清肿瘤标志物的单项检测及联合检测的阳性率并比较

3.6 九项血清肿瘤标志物及联合检测对胃癌检测的敏感性、特异性（%）

4 讨论

4.1 幽门螺杆菌感染率与三种上消化道疾病的关系

4.2 肿瘤标志物在三种上消化道疾病中的检测与分析

5 结论

参考文献

第二部分 TLR接头蛋白SARM、MyD88和TRIF在三种胃部疾病患病组织中的表达情况

1 引言

1.1 TLR的概述

1.2 TLR接头蛋白

1.3 TLR与肿瘤和Hp的关系

2 材料与方法

2.1 材 料

2.2 研究方法

2.4 结果判断

2.5 统计学分析

3 结果

3.1 细胞因子在不同组别中的比较

3.2 TLR接头蛋白的表达情况

3.3 SARM部分核染分析

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述