白藜芦醇通过上调TRIF的抑制因子SARM抑制RSV感染后气道炎症与气道高反应性

摘要

目的：呼吸道合胞病毒(RSV)是引起婴幼儿呼吸道感染的最重要的病毒病原体.白藜芦醇(resveratrol)能减轻呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部气道炎症及气道高反应性,但其机制尚不清楚.本研究进一步探讨白藜芦醇的抗炎作用是否与其上调TRIF的抑制因子SARM有关.方法：RSV以MOI=10感染9HTEo细胞,western blot方法检测感染后12h,24h,36h,48h,72h SARM水平变化.RSV或紫外线灭活的RSV感染6～8周龄雌性BALB/c小鼠,western blot方法检测感染3,5,7天SARM变化情况;给予BABL/c 6-8周雌性小鼠RSV滴鼻建立RSV感染模型,并在RSV感染1h后给予白藜芦醇30mg/(kg.d)腹腔注射.6～8周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、RSV感染组、白藜芦醇腹腔注射组,western blot检测各组感染后第5天SARM及TRIF水平变化.在RSV感染环磷酰胺(CYP)诱导免疫低下BALB/c小鼠模型中,6～8周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、RSV感染组、白藜芦醇腹腔注射组、SARMsiRNA转染组、SARM siRNA肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数(包括总数及分类计数)、肺部病理组织炎症.性对照组,每组5只.4天后SARM siRNA同转染试剂以n/p=7滴鼻转染如小鼠肺部,第5天用western blot的方法检测各组小鼠肺部SARM,TRAM蛋白表达水平,激光共聚焦检测小鼠肺部GFP荧光;检测小鼠清醒状态下气道阻力,研究肺泡灌液(BALF)计细胞总数及分类,组织病理切片评价肺部炎症;ELISA检测BALF中IFN-y的水平.结果：RSV在体内体外实验中均能降低SARM的表达水平,但紫外线灭活的RSV则不能降低BABL/c小鼠肺部SARM表达.而白藜芦醇则可以逆转RSV对SARM的抑制作用.BALF中细胞总数白藜芦醇干预组明显低于RSV感染组,而白藜芦醇干预组与对照组相比差异无显著性,而SARM siRNA转染组明显高于SARM阴性对照转染组,分类计数中,淋巴细胞百分比白藜芦醇干预组较RSV感染组明显降低,而转染SARM siRNA后淋巴细胞百分比升高明显;白藜芦醇干预组清醒状态小鼠气道高反应(吸入乙酰甲胆碱浓度12.5～50.0mg/ml时)较单纯RSV感染组明显减轻,但小鼠肺部转染SARM siRNA后小鼠气道高反应(吸入乙酰甲胆碱浓度12.5～50.0mg/ml时)较SARM siRNA阴性对照组明显升高.HE染色显示RSV感染后肺部细支气管周围、血管周围及肺泡炎症细胞浸润明显增加,白藜芦醇干预后器官周围血管周围炎症减轻,但转染SARM siRNA后炎症明加重.RSV感染后BALF中IFN-y水平较正常对照组明显升高,白藜芦醇干预后IFN-y明显降低,但是SARM siRNA转染后IFN-y水平明显升高.结论：白藜芦醇能够减轻RSV诱发的肺部炎症及气道高反应,其机制可能是通过上调RSV感染后肺部SARM表达水平,抑制TRIF的表达,从而抑制IFN-y,减轻了气道炎症及气道高反应性.