过敏性紫癜血清IgA1刺激脐静脉内皮细胞分泌炎症介质的实验研究

摘要

目的：
　　过敏性紫癜(HSP)是儿童期最常见的系统性小血管炎。尽管已知血管内皮损伤是HSP主要病理变化,但其血管内皮损伤机制尚不清楚。本研究通过观察HSP血清及血清IgA1刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌炎性细胞因子水平及HUVECs中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和核因子-κB(NF-κB)相关基因及蛋白表达的变化,初步探讨儿童过敏性紫癜血清IgA1与血管内皮损伤的关系及血管内皮细胞损伤的分子机制。
　　方法：
　　1.血清采集及IgA1的提取:
　　本院儿科住院确诊为HSP的急性期患儿10例及10例健康体检儿童均于清晨空腹抽取外周静脉血5ml,分离血清;Jacalin亲和层析法提取血清IgA1。
　　2.实验方法:
　　采用体外细胞培养方法,实验分三组观察:HSP组,正常对照组,空白对照组。
　　HSP组分别用患儿血清及患儿血清IgA1与HUVECs共培养;正常对照组分别用正常儿童血清及正常儿童血清IgA1与HUVECs共培养;空白对照组用无血清培养基与HUVECs共培养。培养12h后分别检测各组上清液炎性细胞因子水平。
　　采用MTT比色法检测各组IgA1刺激下HUVECs吸光值,观察不同浓度IgA1刺激HUVECs增殖情况。
　　实时荧光定量聚合酶链反应(Real time PCR)和蛋白质印记技术(Western blot)检测IgA1刺激下HUVECs中NF-κB和ICAM-1mRNA及蛋白表达。
　　结果：
　　1. HSP患儿血清及血清IgA1分别与HUVECs共培养12h后,HSP组上清液IL-8、TNF-α和NO水平均明显高于正常对照组和空白对照组(P<0.05);
　　2.血清 IgA1刺激 HUVECs增殖实验中,正常对照组和HSP组IgA1均可刺激HUVECs增殖(p<0.05);随着IgA1浓度的增加,两组HUVECs增殖程度均有相应增高趋势;在IgA1相同浓度下,与正常对照组相比,HSP组IgA1刺激HUVECs增殖程度更明显(p<0.05)。
　　3.HSP组血清IgA1刺激下HUVECs NF-κB和ICAM-1mRNA表达量明显高于正常对照组及空白对照组(分别P<0.05,P<0.01),且HSP组两者的蛋白表达量也明显高于正常对照组和空白对照组(P<0.01)。
　　结论：
　　1. HSP急性期患儿血清IgA1可诱导体外培养的HUVECs活化并分泌炎性介质。
　　2. IgA1可能通过激活NF-κB通路,上调血管内皮细胞炎性介质的表达而导致内皮细胞损伤。

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中英文缩略词表

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1 前言

2 材料和方法

2.1 主要实验仪器及实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 HSP患儿急性期血清IgA1水平变化

3.2 HSP患儿血清刺激下HUVECs上清液IL-8、TNF-α和NO水平

3.3 HSP患儿血清IgA1对HUVECs增殖的影响

4 讨论

4.1 IgA1在 HSP发病过程中的作用

4.2 细胞因子在HSP发病过程中的作用

4.3 NF-ΚB通路参与HSP发病过程

5 结论

参考文献

附 录

致谢

综述