白血病动物模型建立及阿可拉定对急、慢性髓性白血病的抗肿瘤作用研究

摘要

白血病是造血系统恶性疾病,一般根据病程发展的快慢和白血病细胞的起源进行分类。如:急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性髓细胞性白血病等。药物治疗是治疗白血病常用的方法。近年来研发各类型抗白血病药物成为热点。稳定性、重复性较好的白血病动物模型对于抗白血病药物的筛选评价十分重要。
　　通过文献调研,总结白血病动物模型建立的方法主要有,皮下移植瘤模型和血液模型。皮下移植瘤模型相对于血液模型较容易建立,且技术较为成熟,可动态观察接种肿瘤体积的变化趋势,以及准确评价抗癌药物的药效特点;血液模型,是将人源性白血病细胞接种于机体免疫系统受到打击的免疫缺陷小鼠,使其在血液内和全身组织中繁殖,一般以生存天数作为观察终点;该模型与白血病患者的病理生理状况较为接近,但终点指标受多种因素的影响,实验难度较大。本文着重探讨了血液模型建立方法。通过60Coγ射线照射NOD/SCID小鼠,照射后接种慢性髓细胞性白血病K562细胞和急性骨髓性白血病HL60细胞分别建立了全身扩散的慢性髓细胞性白血病NOD/SCID小鼠血液模型和急性骨髓性白血病NOD/SCID小鼠血液模型,且模型的稳定性和重复性较好。
　　阿可拉定是中药淫羊藿中-淫羊藿苷的水解产物,体外实验表明其对急性骨髓性白血病MV-4-11细胞和慢性髓细胞性白血病K562细胞的增殖有较好的抑制作用,IC50分别为5.95μM、7.81μM和36.00μM、35.32μM;能够明显诱导MV-4-11细胞和K562细胞凋亡,且可以使MV-4-11细胞G0/G1期停滞;RT-PCR实验结果显示出阿可拉定明显下调STAT5基因表达,推测阿可拉定抑制MV-4-11细胞生长可能与STAT5基因表达的下调有关。
　　动物体内实验,本文采用了MV-4-11细胞NOD/SCID小鼠皮下异体移植瘤模型和K562细胞NOD/SCID小鼠血液模型,用于评价阿可拉定对急性骨髓性白血病和慢性髓细胞性白血病的抗肿瘤作用。实验结果显示,阿可拉定明显抑制MV-4-11细胞的瘤块的生长,且明显延长接种K562细胞的白血病小鼠的生存期。提示阿可拉定对急、慢性髓性白血病均有一定的抗肿瘤作用。

目录

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英文摘要

缩略词表

第一部分：白血病NOD/SCID小鼠血液模型建立

1. 前言

2. 实验材料

2.1 主要试剂

2.2 主要仪器设备

2.3 实验细胞株，实验动物

3. 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 小鼠的处理

3.3 细胞接种

3.4 形态学观察小鼠外周血中白血病细胞

3.5 外周血中白细胞数量检测

3.6 外周血中白血病细胞比例检测

3.7 组织病理

3.8 数据处理

4.结果

4.1确立血液模型的建立方法

4.2慢性髓细胞性白血病NOD/SCID小鼠模型的建立及特点

4.3 急性骨髓性白血病NOD/SCID小鼠模型的建立及特点

5. 讨论

6. 结论

参考文献

第二部分:阿可拉定对急、慢性髓性白血病抗肿瘤作用研究

1. 前言

2. 实验材料

2.1主要试剂

2.2主要仪器设备

2.3实验细胞株，实验动物

3. 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 体外MTT法测定细胞增殖

3.3 流式检测细胞凋亡

3.4 流式检测细胞周期

3.5 细胞总RNA提取

3.6 RT-PCR

3.7 体内移植瘤药效学实验

3.8 数据处理

4. 结果

4.1 阿可拉定对急性髓性白血病MV-4-11细胞生长的抑制作用研究

4.2 阿可拉定对慢性髓性白血病K562细胞生长的抑制作用研究

5. 讨论

6. 结论

参考文献

附表：受试动物存活状况和时序卡方统计资料

附录

致谢

人急性早幼粒细胞白血病小鼠模型的建立