孕期弓形虫感染诱导的巨噬细胞亚群的偏移及其对不良妊娠的影响

摘要

目的：宫内感染导致胚胎畸形的病原生物通常称为“TORCH”,弓形虫(Toxoplasma gondii)被列为这五大病原体之首。母体的病原体可经血流通过胎盘在宫内感染胎儿,引起先天性弓形虫病,使孕妇出现流产、死产、早产或增加妊娠合并症,构成围产期的一种严重的不良妊娠结局。宿主受弓形虫感染的获得性免疫应答,主要通过诱导T细胞和巨噬细胞产生具有多种生物活性的细胞因子(cytokines,CKS)发挥免疫调节作用。宿主在孕期主要是Th2应答占优势的免疫环境,Mφ被诱导向M2型细胞偏移,主要功能是分泌抗炎性细胞因子,发挥免疫抑制功能。本研究探讨了孕前与孕中期大鼠感染TgCtwh6(Chinese 1基因型)虫株后,体内M1/M2的偏移及其差异,以及不同阶段感染弓形虫诱导的不良妊娠结局。本文旨在为我国优势基因型相关的先天性弓形虫病的防治提供理论和实验基础。
　　方法：将SD雌鼠分为4组,每组10只:
　　①孕前感染组(inf-1);
　　②孕中感染组(inf-2);
　　③无孕对照组(con-1);
　　④有孕对照组(con-2)。
　　孕前感染组于合笼前一天,孕中感染组于孕第8天,分别腹腔注射1ml生理盐水含2000个速殖子;对照组只注射等量生理盐水。于妊娠第14天处死大鼠,取腹腔巨噬细胞、胎盘及胚胎。胎盘4％甲醛固定,石蜡包埋,HE染色。胚胎用荧光定量PCR做垂直传播的检测,并对获得的胚胎数量进行统计学分析。巨噬细胞上清检测尿素和NO;ELISA试剂盒检测上清细胞因子IL-10,IL-12,TNF-α,和TGF-β水平;用Western blotting检测巨噬细胞内iNOS和Arg-1的表达;提取巨噬细胞RNA,用荧光定量PCR检测Arg-1、iNOS、IL-10,IL-12,TNF-α,和TGF-β的mRNA转录水平。
　　结果：1、对感染后的大鼠持续静脉采血21天,并未检测到Toxo-DNA;大鼠在感染后没有出现竖毛、弓背等机型期表现,也未观察到流产和死亡现象。
　　2、孕前感染组血清NO水平最高;有孕对照组NO水平最低。Arg-1水平在孕前感染组最低;有孕对照组最高。M1型细胞因子iNOS等在孕前感染组表达水平高于其他组,其次是孕中感染组,有孕对照组最低。M2型细胞因子Arg-1等的表达水平在孕中感染组表达最高。
　　3、HE染色结果显示,与孕中期感染相比,孕前感染组胎盘局部出现大量的、更严重的淋巴细胞浸润。两感染组的胚胎统计显示,孕前感染组病理性胚胎发生率更高。
　　结论：孕前、孕中期用TgCtwh6感染SD大鼠,巨噬细胞均出现不同程度的偏移。正常妊娠期腹腔巨噬细胞向M2偏移;而孕前感染TgCtwh6后分泌M1型细胞因子显著升高,使腹腔巨噬细胞向M1极化;孕中期感染TgCtwh6,也使腹腔巨噬细胞向M1偏移,但由于正常妊娠的免疫漂移,抑制了巨噬细胞向M1的过度极化,部分激活了M2。这两个时期感染弓形虫都改变了孕鼠生理状态下的优势免疫应答环境,产生病理性胚胎、先天性感染等不良妊娠结局。

目录

封面

声明

英文缩略词汇表

中文摘要

英文摘要

1.前言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2实验方法

2.3 统计学方法

3 结果

3.1腹腔感染 TgCtwh6 后大鼠腹腔巨噬细胞的偏移

3.2三组大鼠胎盘病理改变

3.4 胚胎数量和质量的统计及弓形虫的垂直传播统计

4 讨论

5 结论

参考文献

附件一

附件二

附件三（综述）