普罗布考对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子β1、血红素加氧酶1干预作用的研究

摘要

目的：糖尿病肾病的发病机制中氧化应激被认为是中心环节。血红素氧合酶-1是细胞氧化应激过程一个非常敏感的指标。糖尿病时,肾脏组织HO-1可被显著诱导,起到抗氧化应激、抗纤维化、抗炎症反应的作用。转化生长因子β1是目前发现的最强的促肾间质纤维化的因子。普罗布考是最强的人工合成抗氧化剂。本项目旨在探讨普罗布考(PB)对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、血红素加氧酶-1(HO-1)表达的干预;阐明普罗布考延缓肾间质纤维化的机制。
　　方法：50只雄性SD大鼠随机分为实验组及对照组。实验组行高糖高脂饮食,并以链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型,将造模成功的34只大鼠随机分为DN组和PB治疗组。治疗组经口灌胃普罗布考(500mg/kg·d-1),灌胃治疗第12周称鼠重并查24h尿蛋白定量及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),处死大鼠抽取血液,观察血清生化指标:血清胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL),血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、C反应蛋白(CRP)。摘除肾脏行组织切片,观察肾间质纤维化程度,免疫组化检测肾组织内HO-1、TGF-β1的表达,RT-PCR检测肾组织内TGF-β1、HO-1核酸水平。所获结果采用独立样本t检验和组内差异采用配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：1、与NC组相比,DN组大鼠均有不同程度的摄食增多,精神不振,活动迟缓,尿量增多,体重减轻,体毛杂乱无光泽。PB干预后以上情况有所改善。实验结束时PB组大鼠体重(334.74±31.46)g与DN组(316.68±43.60)g及NC组(523.20±21.54)g比较均有统计学差异(P<0.05)。2、生化指标与NC组相比,各模型组随机血糖、TC、HDL、Scr、BUN、CRP、24h尿蛋白定量和尿NAG明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);PB组的上述指标与DN组比较,则有明显降低。与NC组相比,PB组、DN组HDL明显降低;PB组HDL较DN组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。但PB组和DN组血糖无统计学差异。3、肾组织病理改变光镜下,NC组未见肾小球、肾小管及间质病变;DN组多数肾小球面积和体积明显增大,肾小球基底膜增厚,肾小球系膜细胞增生、系膜区增宽,部分出现局灶肾小球硬化性改变;部分肾小管上皮细胞浑浊、空泡变性,管腔变窄;PB组病变较DN组减轻,部分肾小球毛细血管袢基膜增厚,肾间质炎性细胞浸润及纤维化较少(P<0.05)。与NC组相比,DN组、PB组肾组织TGF-β1表达增加(P<0.05);与DN组比较,PB组TGF-β1表达减少(P<0.05)。与NC组相比,DN组、PB组肾脏组织HO-1表达增加(P<0.05);与DN组比较,PB组HO-1表达明显增加(P<0.05)。4、肾组织TGF-β1、HO-1的核酸水平与NC组相比,DN组和PB组肾组织TGF-β1核酸水平上调,但PB组低于DN组(P<0.05);与NC组比较,DN组和PB组肾组织HO-1核酸水平上调,但PB组高于DN组(P<0.05)
　　结论：1、HO-1、TGF-β1在糖尿病肾病发生发展中可能起一定的作用。普罗布考能够缓解肾脏病理损伤,其机制可能是通过上调HO-1水平,进而下调TGF-β1起到肾脏保护作用。2、普罗布考能够改善糖尿病肾病大鼠的的一般状态,具有调节血脂代谢,抗炎,减少尿蛋白,改善肾小管损伤,延缓肾功能恶化的作用。

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1 前言

2 材料与方法

2.1 试剂和仪器

2.1.1 主要试剂

2.1.2主要仪器

2.1.3试剂配制

2.2实验方法

2.2.1实验动物

2.2.2实验动物模型制备

2.2.3标本采集

2.2.4动物肾组织学检测

2.2.5动物肾组织HO-1、TGF-β1的RT-PCR半定量测定

2.2.6统计学方法

3 结果

3.1 一般情况

3.2 生化指标

3.3 肾组织病理

3.3.1 HE染色

3.3.2 免疫组化

3.4 肾皮质HO-1mRNA、TGF-β1mRNA水平

4 讨论

4.1 糖尿病肾病与氧化应激

4.1.1 糖尿病肾病氧化应激的机制

4.1.2 糖尿病肾病氧化应激对肾脏的损伤机制：

4.2 普罗布考与糖尿病肾病

4.2.1普罗布考调脂作用与糖尿病肾病

4.2.2普罗布考抗氧化作用与糖尿病肾病

4.2.3普罗布考抗炎症作用与糖尿病肾病

4.3 HO-1、TGF-β1与糖尿病肾病

5 结论

参考文献

附录1

附录2

致谢

文献综述