40株PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs流行特征的研究

摘要

第一部分:PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析
　　目的:了解临床分离含质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对体外抗生素的敏感实验和检测产超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamasesESBLs)株阳性率,了解PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株分布及其表型。
　　菌株来源:40株含PMQR基因临床分离株(21大肠埃希菌和19株肺炎克雷伯菌)采用全自动微生物分析仪对标本进行重新鉴定。包括2株qnrA、3株qnrB4、9株qnrS1,2株同时包含有qnrA和qnrS1,19株aac(6′)-Ib-cr,3株qepA及2株同时包含有qepA和aac(6′)-Ib-cr,均收集于2008-2009年自安徽医科大学第一附属医院检验科。大肠埃希菌ATCC25922为质控菌株,肺炎克雷伯菌ATCC700603为产超广谱β内酰胺酶株。方法:根据2009年美国临床与实验室标准委员会推荐的的标准,采用琼脂对倍稀
　　释法对安徽医科大学第一附属医院检验科收集的40株含PMQR基因的大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对临床14种抗菌药物的药物敏感实验。双纸片确证实验检测ESBLs并分析其耐药表型。对PMQR阳性的菌株进行转移接合实验,验证PMQR与blaESBLs基因的转移性;同时对接合子进行药敏实验。
　　结果:MIC试验显示,除了对多种喹诺酮类抗菌药物显著耐药外,40株临床分离含PMQR基因的菌株还具有ESBLs的表型,对青霉素类(哌拉西林)、第一代头孢菌素(头孢唑啉)、第二代头孢菌素(头孢呋辛)、第三代头孢菌素中的头孢噻肟及头孢他啶显示耐药。经表型确证试验,40株细菌均为产ESBLs菌株。
　　与受体菌相比,100％的接合子对头孢噻肟的MIC增长了32-1024倍,43.4%(13/30)的接合子对头孢他啶的MIC增长了2-256倍,16.7%(5/30)的接合子对头孢吡肟的MIC增长了4-128倍。53.3%(16/30)的接合子对环丙沙星和左氧氟沙星的MIC分别增长了8-128倍和2-128倍。一株原菌对美洛培南耐药,接合子MIC虽然显示敏感,但与受体菌相比,仍增长了8倍。90%或以上的接合子对庆大霉素和阿米卡星的MIC分别增长了64-256和2-128倍。接合子药敏结果显示,β内酰胺类耐药常与其他抗菌药物耐药被共同转移,如喹诺酮类,氨基糖苷类及单环内酰胺类。
　　结论:含PMQR基因的菌株除了对多种喹诺酮类抗菌药物显著耐药外,常具有产ESBLs的表型,对青霉素类(哌拉西林)、第一代头孢菌素(头孢唑啉)、第二代头孢菌素(头孢呋辛)、第三代头孢菌素中的头孢噻肟及头孢他啶耐药及氨基糖甙类等常用抗菌药物耐药,应加强耐药性监测和防治。
　　第二部分:PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs基因的检测与分子流行病学研究
　　目的:了解40株临床分离含质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别,及与PMQR基因在本地区共同传播的流行现状和耐药特征。
　　方法:用煮沸法提取细菌总DNA,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增ESBLs基因,PCR扩增产物分别进行双向序列分析,测序结果在Genbank上比对测序结果,明确blaESBLs基因型;应用ERIC-PCR技术分析PMQR阳性菌株克隆流行传播情况,进行同源性分析。
　　结果:PMQR阳性菌株中blaESBLs基因型分布详见表2,40株临床分离含PMQR基因大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌中共有24株(24/40,60%)检测出blaESBLs基因,主要是CTX-M-9组和CTX-M-1组(见图1),检出率分别为35%(14/40)和27.5%(11/40)。45%(18/40)的菌株同时携带两种或两种以上的β内酰胺酶基因。大肠埃希菌中最常见的blaESBLs基因为CTX-M-14(5/21,23.8%),其次为CTX-M-15(2/21,9.5%);肺炎克雷伯菌中最常见的blaESBLs基因为CTX-M-3(4/19,21%)与CTX-M-65(3/19,15.8%)。大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌中广谱β内酰胺酶TEM-1型的检出率分别达到42.9%(9/21)、57.9%(11/19);肺炎克雷伯菌中SHV型ESBLs仅检出SHV-12与SHV-26型各1株,余均为广谱β-内酰胺酶SHV-1及SHV-11型。ERIC-PCR结果显示菌株间没有一致条带,不属于同一血清型。
　　结论:本地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌存在PMQR与blaESBLs基因的共同传播及流行,包含PMQR基因的菌株多为产ESBLs菌株,以CTX-M-9组和CTX-M-1组ESBLs最为常见。同时携带PMQR与blaESBLs基因的菌株常为多药耐药菌,对喹诺酮、头孢类、氨基糖甙类等常用抗菌药物耐药性较高,应加强耐药性监测和防治。2008-2009年安徽医科大学第一附属医院来源的的PMQR阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌流行病学上没有克隆相关性。

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第一部分PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

1前言

2材料方法

3结果

4 讨论

5 结论

6 参考文献

第二部分PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs基因的检测与分子流行病学研究

1前言

2材料方法

3 结果

5 结论

6 参考文献

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