Hsf1—一种新的睾丸支持细胞雄激素受体靶基因

摘要

目的:探讨雄激素受体(AR)对睾丸支持细胞中热休克转录因子1(Hsf1)基因表达的影响及其作用的分子机制。
　　方法:采用PCR、Westernblot的方法,比较AR特异性敲除(S-AR-/y)小鼠和野生型(WT)小鼠睾丸组织中的Hsf1表达差异以及雄激素及雄激素受体结合对TM4细胞系中Hsf1和HSPs表达水平的影响;采用双荧光素酶报告基因检测系统(Luciferasereport)、凝胶电泳迁移实验(Electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)和染色质免疫共沉淀实验(Chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP),探讨AR调控Hsf1基因表达的分子机制。
　　结果:RT-PCR实验结果及WesternBlot实验结果显示:与WT小鼠比较,S-AR-/y小鼠睾丸组织中Hsf1表达水平显著升高;雄激素显著降低经过AR转染的TM4细胞中Hsf1mRNA和HSF1蛋白表达水平。并且WesternBlot实验发现:HSF1能够升高热休克蛋白105(HSP105)和HSP60水平,但对HSP27、HSP40、HSP70和HSP90无明显影响。EMSA、CHIP实验及Luciferase实验结果显示:AR通过特异性结合Hsf1基因上游启动子上的雄激素作用元件,进而抑制Hsf1基因表达。
　　结论:生精过程中一条可能的信号通路:AR突变或缺陷→Hsf1基因过表达→HSP60和HSP105表达上调→生殖细胞凋亡,生精阻滞。Hsf1可能是睾丸支持细胞中AR直接调控的靶基因。

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第一章 引言

第二章 材料与方法

2.1实验动物及细胞培养

2.2实验试剂及仪器

2.3实验方法

2.4统计学方法

第三章 实验结果

3.1 Hsf1基因在S-AR-/y 小鼠睾丸中的表达

3.2 Hsf1基因在TM4细胞中的表达

3.3 HSF1蛋白在TM4细胞中的表达差异

3.4 AR基因是否与Hsf1基因的启动子直接结合

3.5 AR基因通过结合Hsf1上游启动子抑制其表达

3.6 探讨热休克蛋白在TM4细胞中的表达水平

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

攻读硕士期间发表文章情况

个人简历

附录

致谢

综述