索拉非尼联合吉西他滨不同序贯用药对非小细胞肺癌的协同作用

摘要

索拉非尼是一种高选择性小分子多靶点酪氨酸激酶抑制剂,目前有多项研究表明索拉非尼对各类肿瘤细胞具有潜在的抗增殖作用,其中包括非小细胞肺癌(NSCLC)。本研究通过体外实验探讨了索拉非尼单药的抗增殖效应及相关机制,以及通过不同序贯联合的方式将索拉非尼与化疗药物吉西他滨联合作用于表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感以及耐药的NSCLC细胞株PC9和A549细胞,探讨各种序贯方式产生的不同抗增殖效应,并阐述相关机制。
　　将A549和PC9细胞株进行一段时间的细胞培养。MTT法检测不同浓度的索拉非尼或吉西他滨对两种细胞株的增殖抑制作用,分别做出两种单药的量效曲线图,并计算出两药对A549及PC9细胞株的半数抑制率(IC50值)。然后将不同倍数的索拉非尼和吉西他滨的IC50浓度,不同序贯方式的联合作用于两种细胞,分别检测其抑制率,并计算出联合指数。流式细胞仪分别检测单药索拉非尼和吉西他滨对两种细胞株细胞周期的影响,以及两药不同序贯作用方式对细胞周期的影响。蛋白质印迹法检测索拉非尼和吉西他滨单药以及不同序贯联合作用方式下对细胞中p-PDGFR、p-AKT,p-ERK及Bcl-2表达的影响。
　　我们发现吉西他滨和索拉非尼单药对A549和PC9细胞株具有增殖抑制作用,且有浓度依赖性,索拉非尼和吉西他滨作用于A549细胞72h的IC50值分别为5.91±0.22μmol/L和10.38±0.80nmol/L;作用于PC9细胞72h的IC50值,分别是6.13±0.14μmol/L和8.38±0.64nmol/L。在序贯联合作用方式中,先给予吉西他滨后给予索拉非尼的序贯方式产生了明显的协同效应,而先给予索拉非尼后给予吉西他滨的作用方式产生了药效的拮抗作用。细胞周期分析显示索拉非尼将A549和PC9细胞阻滞于G0/G1期;而吉西他滨将A549和PC9细胞阻滞于S期;先给予吉西他滨后给予索拉非尼的序贯方式使得G0/G1期细胞比例降低;而先给予索拉非尼后给予吉西他滨的序贯方式使得S期细胞减少;可见不同序贯作用方式时,两药对细胞周期的影响产生了相互干扰或叠加的作用。在检测蛋白表达过程中,我们发现吉西他滨能上调p-AKT,p-ERK及Bcl-2的表达,而索拉非尼可以明显抑制p-AKT,p-ERK及Bcl-2表达;先吉西他滨后索拉非尼的序贯作用方式可以使原先被吉西他滨激活的p-AKT,p-ERK及Bcl-2被随后的索拉非尼所抑制,所以产生了协同抗增殖作用;而先索拉非尼后吉西他滨的序贯作用方式使得先被索拉非尼抑制的信号分子再次被随后的吉西他滨所激活,从而产生了药效的拮抗。
　　本研究通过体外研究的方式,证明了索拉非尼单药能抑制非小细胞肺癌细胞株A549和PC9细胞的生长,且先给予化疗药物吉西他滨后给予索拉非尼的序贯给药方式能产生明显的协同抗增殖效应。

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1、 前言

2、研究方法

2.1仪器和材料

2.2增殖抑制实验

2.3联合和序贯用药的增殖抑制实验

2.4流式细胞仪周期分析

2.5Western Blot实验

2.6 统计分析

3、研究结果

3.1 索拉非尼和吉西他滨单药作用于A549和PC9细胞的IC50值

3.2 索拉非尼和吉西他滨序贯和联合作用对A549和PC9细胞的增殖抑制率及各组的联合指数（CI）值

3.3 索拉非尼和吉西他滨单药、联合及序贯给药对A549和PC9 细胞株细胞周期的影响

3.4 索拉非尼和吉西他滨单药、联合及序贯用药对A549、PC9细胞AKT，p- AKT， ERK1/2，p- ERK1/2，PDGFRβ，p-PDGFRβ，BCL-2蛋白表达的影响

4、 讨 论

5、 结论

参考文献

附录

致谢

综述