黄芪总苷诱导NB4凋亡过程中死亡受体通路分子变化

摘要

急性白血病(AL)属于血液系统恶性肿瘤性疾病,是国内十大高发恶性肿瘤之一。治疗方法以化疗为主,但因传统化学药物较大的副作用,天然中草药逐渐受到专家学者们的青睐,越来越多的中药被证实具有抗白血病作用且逐渐被应用到临床。本课题组前期研究证明黄芪总苷(astragalosides,AST)具有体外抑制急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4生长,并在一定范围内可以诱导其凋亡,凋亡率呈剂量依赖性。基于此结果,本研究分别用不同浓度诱导NB4细胞凋亡,通过测定相关分子变化以探明NB4细胞凋亡可能的机制。
　　目的
　　探讨AST诱导NB4细胞凋亡过程中死亡受体通路的各分子变化,以说明AST是否依赖死亡受体通路参与NB4细胞凋亡发生。
　　方法
　　取对数生长期的NB4细胞进行实验。不同浓度AST(200、300、400μg/ml)作用NB4细胞48h诱导其凋亡,分别记为200、300、400μg/mlAST组,同时设置细胞对照组。
　　1.使用台盼蓝染色法观察NB4细胞生长情况及经AST作用后细胞变化情况,使用检测活力>95％的NB4细胞进行以下实验。
　　2.使用RT-PCR法检测各AST组及细胞对照组IKKβ、IκBα、NF-κBp65及FasmRNA相对表达量的变化。
　　3.使用分光光度法检测各AST组及细胞对照组Caspase-8的相对活性变化。
　　结果：
　　1.不同浓度AST作用NB4细胞48h后,IκBαmRNA表达随AST浓度升高依次增高,各浓度AST组间及与细胞对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各浓度AST组与细胞对照组比较NF-κBp65mRNA表达均有下降(P<0.05),但各浓度AST组间比较表达差异无统计学意义。同时IKKβ及Fas的mRNA表达无明显变化,各浓度AST组间及与细胞对照组比较差异均无统计学意义。
　　2.各浓度AST组与细胞对照组比较Caspase-8相对活性明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05),但各浓度AST组间比较差异无统计学意义。
　　结论
　　AST诱导NB4细胞凋亡,可能与死亡受体通路上IκBαmRNA表达上调、NF-κBp65mRNA表达下调,Caspase-8活性升高有关。说明死亡受体通路的激活可能是AST诱导NB4细胞凋亡的机制之一。

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1.前言

2.材料与试剂

2.1实验器材

2.2细胞株

2.3主要试剂

3.实验原理与方法

3.1细胞培养技术

3.2主要试剂的配制

3.3台盼蓝实验原理：

3.4 RT-PCR法测IKKβ、IκBα、NF-κBp65及Fas的mRNA的表达原理：

3.5 Caspase-8活性检测原理：

3.6 统计学处理

4.结果

4.1 IKKβ、IκBα、NF-κBp65、Fas的mRNA的表达变化

4.2 Caspase-8活性变化

5.讨论

6.结论

参考文献

附录

致谢

综述