丹参酮ⅡA磺酸钠对脑缺血再灌注模型大鼠神经保护作用的研究

摘要

脑血管疾病(Cerebrovascular Diseases,CVD)是神经系统疾病中最为常见和多发的疾病,近年来已成为全球人口死亡和致残的首要原因,严重威胁人类的健康和生命安全。其中,急性缺血性脑卒中(脑梗死)是最常见的脑卒中类型,约占全部脑卒中病例的60％～80%。即使在存活的脑卒中患者中,仍有大部分存在不同程度的神经功能障碍,导致不同程度的残疾,给家庭和社会带来沉重的负担。
　　丹参(SalviaMiltiorrhza)是双子叶植物唇形科,传统中医常用的活血化瘀药物,在我国传统医药领域应用已有二千多年历史。根据我国传统中医理论,丹参具有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、除烦安神等功效。20世纪30年代至今,研究者对丹参的有效成分及其药理作用做了充分的研究。丹参酮ⅡA为丹参中分离的二萜醌类化合物,是丹参的主要有效成分。丹参酮ⅡA磺酸钠(简称DS-201)为脂溶性丹参酮ⅡA,经磺化而得到的水溶性物质。
　　丹参酮ⅡA作为中药有效成分单体制剂,在我国面市已数十年,广泛用于治疗心肺系统疾病、各类皮肤及浅表组织炎症。研究证明,丹参酮ⅡA能有效改善冠状动脉侧支循环,减小梗死心肌面积,同时可解除微血管痉挛,增加微循环流速和流量,消除局部静脉血液淤滞,改善组织细胞缺血缺氧所致的代谢障碍,在肺部疾病中可抑制肺组织纤维化,减少肺组织炎性细胞浸润,增加肺毛细血管血流量。
　　近年通过大量研究,丹参酮ⅡA在脑血管疾病领域的应用逐渐受到关注。本实验意在研究其对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。
　　研究目的：
　　本实验研究丹参酮ⅡA磺酸钠对局灶性脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护作用,探讨其部分机制。
　　研究方法：
　　1、实验动物分组清洁级SD大鼠40只,体重202-305(247.57±32.09)g,按随机数字表法分为四组,分别为假手术组(Shamoperated)、局灶性脑缺血模型组(简称:模型组,Model)、丹参酮ⅡA磺酸钠预处理组(简称:预处理组,Pretreatment)、丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组(简称:治疗组,Treatment),每组10只大鼠。
　　2、动物模型制备模型组、预处理组和治疗组采用目前公认的改良Longa法,放置线栓制作大脑中动脉闭塞模型(Middlecerebralarteryocclusion,MCAO),2小时后拔出线栓,形成再灌注,获得实验所需要的缺血再灌注损伤模型。假手术组仅做切皮、分离血管,不放置线栓。
　　3、给药方法假手术组、模型组大鼠分别在MCAO造模手术前30分钟,腹腔注射生理盐水2ml;预处理组和治疗组大鼠给予腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠原液30mg/kg,预处理组大鼠在MCAO造模手术前30分钟注射;治疗组在MCAO造模手术后2小时,开放血流时注射。
　　4、脑梗死体积百分比计算大鼠处死后,脑组织薄片,进行TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色,数码相机拍照染色标本,使用计算机图像分析软件(HPIAS—1000)计算梗死区脑组织比例。
　　5、脑含水量计算实验大鼠于再灌注后24h处死,取出完整大脑,留梗死半球,电子精密天平测湿重,再将标本置于100℃电热恒温干燥箱至恒重后测干重。计算脑含水量。
　　6、神经功能评分应用ZeaLonga神经功能评分法,于再灌注后12小时、24小时分别进行神经功能评分,评价大鼠神经功能缺失状况。评分标准:无神经功能损伤症状为0分;不能伸展对侧前爪为1分;向对侧旋转为2分;向对侧倾倒3分;无自主活动伴意识障碍为4分;死亡为5分。得分越高,提示神经功能损伤越严重。
　　7、TNF-α含量测定采用双夹心酶联免疫吸附法对各组大鼠血清中TNF-α进行定量分析。
　　8、统计学处理采用SPSS13.0统计软件对实验数据进行统计学处理。实验计量数据用均数标准差(表示,多组比较采用单因素方差分析,两组间比较采用两样本均数t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1、梗死体积:TTC染色后,假手术组未见明显梗死灶,其余各组均有不同程度的白色梗死灶。经测量梗死体积并进行统计学分析,各组差异有显著意义,F=7.29,P<0.01;进一步配对比较,模型组高于预处理组和治疗组,t=13.70、11.26,P<0.01。
　　2、脑含水量:各组脑含水量比较,差异有显著意义,F=8.19,P<0.01;进一步配对比较,模型组脑含水量高于预处理组和治疗组,t=3.13、2.97,P<0.05。
　　3、神经功能:除假手术组外,其余各组不同时间点均可见不同程度的神经功能缺损。评分比较,差异有显著意义,术后12小时,F=4.72,P<0.05;术后24小时,F=9.72,P<0.01;配对比较,模型组不同时间点神经功能评分高于预处理组和治疗组t=2.74、2.82、3.34、2.86,P<0.05。
　　4、血清TNF-α:各组血清TNF-α含量差异有显著意义,F=3.96,P<0.05;配对比较,模型组高于预处理组和治疗组t=2.78、2.12,P<0.05。
　　结论：
　　丹参酮ⅡA磺酸钠可降低局灶性脑缺血再灌注模型大鼠的脑梗死体积百分比、脑含水量、血清TNF-α含量,改善神经功能缺损。抑制炎症因子表达可能是其对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用的机制之一。

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前言

1. 材料和方法：

1.1 实验材料：

1.2 实验方法：

1.3 统计学处理

2. 结果：

2.1 TTC 染色结果

2.2 脑梗死体积百分比

2.3 脑含水量

2.4 神经功能评分

2.5 血TNF-α含量

3讨论

3.1 减小梗死体积百分比

3.2 减轻脑水肿

3.3 改善神经功能缺损

3.4 减少炎症因子表达

4. 结论

参考文献

附录

致谢

综述：