抑肽酶对全氟异丁烯致大鼠急性肺损伤的治疗作用

摘要

目的：研究评估抑肽酶对有毒气体全氟异丁烯(PFIB)吸入致大鼠急性肺损伤的治疗作用。
　　方法：建立PFIB诱导的大鼠急性肺损伤的动物模型。将成年雄性SD大鼠40只,按体重排序,以体重为区组因素随机分成5组,ALI组(I组)、抑肽酶5mg/kg治疗组(L组)、抑肽酶15mg/kg治疗组(M组)、抑肽酶30mg/kg治疗组(H组)、对照组(N组),前4组动物均经全身暴露于自制PFIB动态吸入染毒系统染毒5min,染毒浓度约为287mg/m3。有毒气体PFIB的浓度是通过气相色谱分析仪测定。染毒30min后,将5mg/kg的抑肽酶溶液注射到L组大鼠腹腔内,15mg/kg的抑肽酶溶液注射到M组大鼠腹腔内,30mg/kg的抑肽酶溶液注射到H组大鼠腹腔内。观察各组大鼠的呼吸、摄食、精神状态及活动情况。24小时后结束实验,称量处死前体重,然后经腹腔注射水合氯醛(0.4ml/100g)麻醉大鼠,打开腹腔,取腹主静脉血,测定血清中IL-6、TNF-α水平。打开胸腔,暴露气管,结扎右肺,以5ml生理盐水灌洗左肺,获取肺泡灌洗液,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)总蛋白含量。取中肺测定肺湿干重比(W/D);取右肺上、下叶制成肺组织匀浆,测定肺组织匀浆中中性粒细胞弹性蛋白酶的含量,及用蛋白质免疫印迹方法显示肺组织中NF-кB的表达情况。取右肺中叶组织,经10％福尔马林液固定后,予石蜡包埋、切片、HE染色,最后在光镜下观察肺组织病理改变。
　　结果：1.各组大鼠的一般表现:染毒前,动物呼吸平稳。各组大鼠活动正常。染毒后,I组动物表现为呼吸加快,烦躁不安,口唇紫绀,随后出现气喘、口鼻出现液体或泡沫、皮毛枪刺、体重下降。活动度下降。L、M、H组较I组情况好转,以H组较明显。
　　2.肺组织湿干重(W/D)比:I、L、M、H组的肺(W/D)比值显著高于N组(均P<0.05);L、M、H组与I组比较,L组肺(W/D)比值降低不明显(P>0.05),M、H组有显著性降低,且H组降低最显著(均P<0.05)。
　　3.支气管肺泡灌洗液内蛋白含量:I、L、M、H组与N组比较支气管肺泡灌洗液蛋白含量显著增高(P<0.05)。L、M组与I组比较BALF蛋白含量有所降低,但差异不明显(P>0.05)。H组与I、L、M组比较肺泡灌洗液中蛋白含量明显下降(P<0.05)。
　　4.血清TNF-α含量:I、L、M、H组与N组比较TNF-α含量明显升增高(P<0.05)。L、M、H组与I组比较TNF-α含量都下降(P<0.05)。M组与L组比较TNF-α含量有所降低,但差异不显著(P>0.05)。H组与L、M组比较TNF-α含量有较大程度下降(P<0.05)。
　　5.血清IL-6含量:I、L、M、H组与N组比较IL-6含量明显增高(P<0.05)。M组与L组比较IL-6含量有所降低,但差异不显著(P>0.05)。M、H组与I组比较IL-8含量都明显下降(P<0.05)。H组降低最明显(P<0.05)。
　　6.肺组织弹性蛋白酶的含量:I、L、M、H组较N组都有不同程度的升高,且均有显著差异(P<0.05)。M、H组较I组显著降低,以H组降低最明显(P<0.05)。
　　7.肺组织NF-кB的表达情况:用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠NF-кB蛋白的表达情况后发现,I、L、M、H组较N组均高表达,H组较I、L、M组表达较低。
　　8.肺组织肉眼观:N组肺脏表面光整,呈粉红色,表面未见出血病灶,切面均匀,没有粉红色泡沫状液体流出。I组肺脏颜色较暗,肺的体积较正常时增大,弹性下降,肺包膜下紧张充血,切面有粉红色泡沫状液体溢出。L组损伤情况与I组类似,M、H组肺组织损伤明显减轻。
　　9.肺切片镜下观:N组无损伤,肺泡结构完整,肺泡腔分明,肺泡间隔无断裂、增宽等改变。I组损伤最明显,肺上皮细胞损伤、肺泡壁明显增厚,肺间质水肿、富含蛋白的液体渗出,许多炎性细胞充盈浸润,毛细血管严重扩张,肺泡腔出血,肺间隔断裂、透明膜形成、肺泡萎陷。L组损伤程度也较重,M组损伤程度较轻,H组损伤最轻。
　　结论：1、本课题中实验大鼠经全身暴露于自制PFIB动态吸入染毒系统染毒后,成功制作成ALI的动物实验模型。2、高剂量抑肽酶可明显减轻PFIB诱导ALI大鼠的肺部炎性反应,降低肺内蛋白渗出,减轻肺水肿,而中低剂量作用不明显。抑肽酶能减轻肺损伤的作用机制可能跟降低中性粒细胞弹性蛋白酶的活性,抑制过度的炎症反应,阻断TNF-α、IL-6等炎性介质的释出和抑制肺内NF-kB的表达有关。

目录

封面

声明

目录

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

1.前言

2 材料与方法

2.1实验动物

2.2 主要仪器

2.3主要试剂

2.4实验路线和方法

2.5 统计学处理

3 结果

3.1 预实验中实验小鼠的生存分析结果

3.2 实验大鼠的一般情况

3.3 肺湿重与干重比值、肺泡灌洗液总蛋白浓度及中性粒细胞弹性蛋白酶含量结果比较 （见表1）

3.4 血清TNF-α、IL-6含量结果比较 （见表2 ）

3.5 NF -κB的Western blotting检测（见图3）

3.6 各组肺组织病理学检查（见图4）

4 讨论

4.1 全氟异丁烯诱导ALI的特点

4.2 中性粒细胞在PFIB诱导大鼠急性肺损伤中的所起作用的探究

4.3 蛋白酶抑制剂与急性肺损伤的关系探讨

4.4 NE在PFIB诱导大鼠急性肺损伤中的所起作用的探讨

4.5 NF-κB在PFIB诱导大鼠ALI中的所起作用的探讨

4.6 研究中的不足与反思

4.7 下一步的研究设想

5 结论

参考文献

个人简介

致谢

综述