Rad蛋白对心肌营养素1致大鼠心肌肥大的保护作用及机制

摘要

目的:心肌肥大是一种常见的病理现象,是心肌适应不良的一种病理代偿形式,可导致心脏体积增大,因此早期干预心肌肥大是防治心力衰竭的关键。本实验采用腺病毒介导 Rad基因在体外培养的大鼠心肌细胞中过表达和低表达,用心肌营养素1诱导心肌肥大,研究Rad基因对心肌肥大是否具有保护作用,并对其作用机制探讨,有望为心力衰竭的早期防治提供新的靶点。
　　方法:针对Rad基因序列构建Rad过表达和低表达腺病毒载体,重组腺病毒转染体外培养的心肌细胞。
　　研究内容分两部分,第一部分:研究Rad不同表达水平的心肌细胞在心肌营养素1致肥大刺激下,对心肌肥大标志基因ANF表达水平的影响。选择SPF级,1～2d的SD大鼠,雌雄不限,体外培养心肌细胞,分为8组:空白对照组(control,n=3),Ad-GFP组,Ad-RNAi组,Ad-Rad组,肥大模型组(心肌营养素1诱导),肥大+Ad-GFP组,肥大+Ad-RNAi组,肥大+Ad-Rad组,心肌营养素1致肥大刺激48h后,RT-PCR和Western blot检测Rad、ANF mRNA和蛋白表达水平。
　　第二部分:研究Rad蛋白过表达和低表达的心肌细胞在心肌营养素1致肥大刺激下,JAK1和STAT3蛋白及其磷酸化蛋白表达水平的变化。SPF级,1～2d的SD大鼠,雌雄不限,体外培养大鼠心肌细胞,分为8组:空白对照组(control,n=3),Ad-GFP组,Ad-RNAi组,Ad-Rad组,肥大模型组(心肌营养素1诱导),肥大+Ad-GFP组,肥大+Ad-RNAi组,肥大+Ad-Rad组,心肌营养素1致肥大刺激30min后,Western blot检测JAK1和STAT3蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平变化。
　　结果:第一部分:Rad对心肌营养素1致大鼠心肌肥大的影响
　　与空白对照组比较,肥大模型组ANF蛋白表达明显增加(P<0.05);肥大+Ad-Rad组ANF蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显降低(P<0.05),肥大+Ad-RNAi组ANF蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显升高(P<0.05)。肥大模型组Rad mRNA和蛋白表达较空白对照组明显降低(P<0.05);Ad-Rad组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显增加(P<0.05),Ad-RNAi组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显降低(P<0.05)。
　　第二部分:Rad对心肌营养素1致大鼠心肌肥大JAK1/STAT3信号通路影响
　　与空白对照组比较,肥大模型组JAK1和STAT3磷酸化蛋白表达明显增加(P<0.05);肥大+Ad-Rad组JAK1和STAT3磷酸化蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显降低(P<0.05),肥大+Ad-RNAi组JAK1和STAT3磷酸化蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显升高(P<0.05)。
　　结论:Rad过表达对CT-1致大鼠心肌肥大模型具有保护作用,这种保护作用与Rad抑制JAK1/STAT3信号通路的活性有关。

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1. 引言

2.材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法及分组

3.结果

3.1第一部分实验结果Rad对CT-1致心肌肥大的影响

3.2 第二部分实验结果 Rad 抑制 CT-1 致大鼠心肌细胞肥大的信号机制研究结果

4.讨论

4.1大鼠心肌细胞原代培养

4.2 CT-1致大鼠心肌细胞肥大模型的制备

4.3 Rad对CT-1致大鼠细胞肥大的影响

4.4 Rad抑制CT-1致心肌肥大的信号转导通路

5.结论

参考文献

致谢

综述